醛武万方数据天津医药２０１１年９月第３９卷第９期汉博士德公司），磷酸肌酸钠（海口力奇制药股份有限公司）。１．２实验分组及方法５０只健康ＳＤ大鼠（军事医学科学院生物研究所）．体质量２８０—３２０ｇ．雌雄不拘．随机分为５组，每组１０只。参照文献【１ｌ方法颈内动脉尼龙线线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型（ＭＣＡＯ）。Ｓｈａｍ组。不栓塞大脑中动脉，腹腔注射生理盐水１０ｍＬ；Ｉ／Ｒ组，线栓大脑中动脉２ｈ，经历２４ｈ再灌注；Ｌ组、Ｍ组、Ｈ组，在经历线栓大脑中动脉２ｈ前分别腹腔注射磷酸肌酸钠２０、４０、８０ｍ以ｇ，手术结束，缝合、清洁伤口，分笼饲养，经历２４ｈ再灌注。再灌注２４ｈ末，测血清中ＳＯＤ、ＭＤＡ及脑组织ＭＰＯ、Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰ酶活性。１．３Ｂｅｄｅｒｓｏｎ神经功能缺损评分在大鼠大脑中动脉闭塞处理后２４ｈ末，进行５分制评分。无神经损伤症状计０分；提尾实验不能完全伸展对侧前爪计１分；提尾时向左侧转圈计２分；行走时自发向左侧转圈计３分；向对侧倾倒，或不能自发行走。意识丧失计４分“。１．４脑梗死体积的测定ＨＥ染色：实验结束处死动物，取部分脑组织切片投入４％甲醛液固定。浸蜡包埋、切片与贴片后，经乙醇、二甲苯脱水透明。脱蜡染色。１ＴｒＣ染色：２４ｈ后，断头处死动物，去掉小脑及低位脑干，视交叉前后制备，按２ｍｍ问隔冠状切成６片，置于氯化三苯基四氮唑（ＴｒＣ）溶液中。在３７℃水浴中避光孵育３０ｍｉｎ。待显色完全后置于４％的多聚甲醛中固定２４ｈ。正常脑组织旱深红色．梗死组织不着色呈苍白色。数码相机给每片组织照相．输入计算机。按固定比例进行正反两面拍照。Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ软件测定各切片正反两面的梗死灶面积，正反两面面积平均值乘以厚度，得出梗死灶体积。１．５统计学方法应用ＳＰＳＳ１１．０统计学软件，所有计量资料以均数±标准差（ｉｔｓ）表示。组Ｉ＇日Ｊ比较采用单因素方差分析．组间两样本均数的比较采用ｑ检验（ＳＮＫ法）。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。２结果２．１ＭＰＯ、ＭＤＡ、Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰ酶及ＳＯＤ变化再灌注２４ｈ末，脑组织中ＭＰＯ、血清ＭＤＡ检测结果显示，Ｉ／Ｒ组较Ｉ。组、Ｍ组、Ｈ组明湿升高，Ｍ组较Ｈ组明显升高，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。血清ＳＯＤ、脑组织Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰ酶Ｉ／Ｒ组较Ｌ组、Ｍ组、Ｈ组明显降低，Ｍ组较Ｈ组明显降低，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），见表ｌ。２．２ＨＥ染色结果Ｓｈａｍ组大鼠脑组织神经元基本正常，核居中，无明显的病变及炎细胞病理浸润过程，见图１。Ｉ／Ｒ组的大脑皮质神经元均见中到重度变性、坏死，神经元结构模糊，出现不同程度的核深染、核固缩、核溶解，正常神经元数目明显减少，见图２。Ｌ组与Ｍ组可见神经元中到重度的神经元万方数据８３９表１各组再灌注２４ｈ末酶学活性比较（ｎ＝ｌＯ，ｉ±ｓ）’Ｐ＜Ｏ．０５变性、坏死，胞浆肿胀，胞核变浅或不规则，正常神经元数目较Ｉ／Ｒ组多，见图３、４。Ｈ组脑皮质区可见轻度水肿及灶状出血，见图５。２．３ＴＴＣ染色Ｓｈａｍ组无明显梗死区域；Ｉ／Ｒ组、Ｌ组、Ｍ组及Ｈ组均可见明显的白色梗死灶，主要集中在额顶区皮质、尾壳核背外侧。Ｂｅｄｅｒｓｏｎ评分显示，Ｉ／Ｒ组大鼠神经功能缺损明显重于磷酸肌酸钠预给药组。Ｉ／Ｒ组脑梗死体积及梗死体积所占百分比大于Ｌ、Ｍ、Ｈ组，Ｌ组脑梗死体积所占百分比大于Ｍ、Ｈ组，差异均有统计学意义（尸＜０．０１），见表２。表２各组神经功能缺损评分及脑梗死体积所占百分比比较（ｎ＝１０，ｉ±ｓ）＋Ｐ＜０．０５．“Ｐ＜０．０１８４０３讨论在体动物模型具有重现性好、价格低廉、一定程度上可直接过渡到临床应用等优点。研究表明脑Ｉ／Ｒ是一复杂的病理生理过程，脑经历一定时间的Ｉ／Ｒ后会发生神经细胞的损伤和功能障碍。触发一系列复杂的级联反应，包括诸多酶活性改变、钙平衡失调、过量自由基生成、脂质过氧化增强、线粒体功能障碍等Ｉ¨Ｉ。血清ＳＯＤ酶、ＭＤＡ水平及脑组织内ＭＰＯ、Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰ酶活性变化作为实验动物脑组织损伤生化标志物已被广泛认可。本研究通过检测上述指标变化，间接了解脑的损伤程度；ＨＥ染色结果表明急性局灶性脑缺血梗死模型建立成功，ＴＴＣ染色直观地表明了脑梗死的体积。磷酸肌酸钠是外源性磷睃肌酸盐，现已广泛应用于临床。研究表明，其可明显改善微循环供血，为细胞的有氧氧化提供能量【４－。本研究观察磷酸肌酸钠预给药有减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的作用，Ｂｅｄｅｒｓｏｎ神经功能缺损评分以及１ＴｒＣ染色结果表明２０、４０、８０ｍｓ／ｋｓ剂量的预给药可明显改善由大鼠脑局灶性缺血所致的神经功能损伤、缩小脑梗死体积、减轻脑细胞水肿。ＨＥ染色病理切片也表明Ｉ／Ｒ组较磷酸肌酸钠预给药组核深染、核固缩、核溶解现象明显增多，且神经元数目明显减少，提示了Ｉ／Ｒ组脑细胞损伤更为严重。ＭＤＡ是脂质过氧化的产物，是一种重要的交联因子，可导致神经细胞的功能丧失；ＳＯＤ则是氧自由基清除剂，可有效地清除氧自由基对机体的损伤。再灌注末，Ｉ／Ｒ组脑组织ＭＤＡ水平明显高于Ｌ、Ｍ、Ｈ组，而ＳＯＤ明显低于Ｌ、Ｍ、Ｈ组，表明磷酸肌酸钠预给药可以有效减轻脑缺』Ｉ｝Ｌ再灌注后产生大量的氧自由基对于脑细胞的损伤，减轻了脂质过氧化，使膜受体、膜蛋白酶、离子通道得到有效的保护，进而也使ＭＤＡ产生减少，减轻细胞的呼吸链潘ｌ生及细胞膜上离子泵受损，一定程度预防了脑组织不可逆性损伤的发生。Ａｎｄｒｅｙ等恤研究ＳＯＤ对于脑组织经历缺血再灌注损伤过程中的作用，也证实了ＳＯＤ可清除过量的氧自由基，有效地减轻氧自由基对脑组织的损伤。ＡＴＰ是脑组织细胞重要能量来源，脑Ｉ／Ｒ造成的细胞能量代谢障碍可使脑细胞内ＡＴＰ逐渐耗竭，依靠ＡＴＰ运转的离子泵（Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰ酶）因能量障碍万方数据而受到抑制，引起细胞内Ｎａ＋增多和Ｃａ２＋超载，细胞内环境平衡破坏，导致神经元细胞的死亡。本研究显示，Ｉ／Ｒ组Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰ酶活性较Ｌ组、Ｍ组、Ｈ组明显降低，说明脑组织经历Ｉ／Ｒ后，Ｉ／Ｒ组与Ｌ组、Ｍ组、Ｈ组相比可利用的ＡＴＰ减少，由此可推断，给予外源性的磷酸肌酸盐可有效地提高Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰ酶活性。Ａｄａｍｃｚｙｋ等１６研究发现，脑组织缺ｍ缺氧时，由于ＡＴＰ减少，可激活大量的酶，酶活性的增加引起一系列级联反应，产生大量损伤性氧自由基，导致脑组织细胞的损伤。由此笔者推测，预给药的磷酸肌酸钠可作为脑的能量储存形式之一，当脑组织遭遇缺血缺氧损伤时，脑细胞内线粒体氧化磷酸化受阻，脑组织大量消耗ＡＴＰ，致ＡＤＰ增多，磷酸肌酸钠可将高能磷酸键转移给ＡＤＰ，生成ＡＴＰ作为能量供给脑细胞使用，实现对脑组织的保护作用。综上，肌酸磷酸钠预给药可有效减轻Ｉ／Ｒ后氧自由基对脑组织的损伤、一定程度上增强了脑组织内Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰ酶活性，为脑细胞内线粒体氧化磷酸化提供能量，有效地减少大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积，对脑缺血再灌注后的损伤有减轻作用。（图ｌ一５见插页）参考文献【ｌ】先雄斌。杨朝鲜．大鼠脑缺血再灌注模型的建立【Ｊ】．中国老年学杂志２００９，２９（１０）：２１—２３．［２１ＢｅｄｅｒｓｏｎＪＢ。ＰｉｔｔｓＬＨ。ＴｓｕｊｉＭ．ｅｔａ１．Ｒａｔｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃ—ｃｌｕｓｉｏｎ：ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ。１９８６，１７（３）：４７２—４７６．［３１ＷｈｉｔｅｈｅａｄＳＮ，ＭａｓｓｏｎｉＥ，ＣｈｅｎｇＧ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｒｉｆｌｕｓａｌａｎｄａｓ－ｐｉｒｉｎｉｎａｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ。２００７．３８（２）：３８ｌ一３８７．【４】ＷａｋａｄｅＣ，ＫｈａｎＭＭ，ＤｅＳｅｖｉｌｌａＬＭ。ｅｔａ１．Ｔａｍｏｘｉｆｅｎｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃ—ｔｉｏｎｉｎｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｖｏｌｖｅｓａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎｏｆｋｉｎａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｓｕｐｅｒ－ｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅｌＪ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００８，１４９（Ｉ）：３６７－３７９．［５１ＡｎｄｒｅｙＹＡ，ＡｎｔｏｎｅｌｌａＳ，ＭｉｃｈａｅｌＲＤ，ｅｔａ１．Ｔｈｒｅｅｄｉｓｔｉｎｃｔｍｅｃｈａ・ｎｉｓｍｓｇｅｎｅｒａｔｅｏｘｙｇｅｎｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓｉｎｎｅｕｒｏｎｓａｎｄｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｃｅｌｌｄｅａｔｈｄｕｒｉｎｇａｎｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｌＪ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００７，２７（５）：１１２９—１１３８．【６】ＡｄａｍｃｚｙｋＳ，ＲｏｂｉｎＥ，ＳｉｍｅｒａｂｅｔＭ，ｅｔａ１．ｓｅｖｏｆｌｕｒａｎｅｐｒｅ－ａｎｄｐｏｓｔ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｐｒｏｔｅｃｔｔｈｅｂｒａｉｎｖｉａｔｈｅｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＫ＋一ＡＴＰｅｈａｎｎｅｌｌＪ］．ＢｒＪＡｎａｅｓｔｈ。２０１０，１０４（２）：１９１－２００．（２０１０—１０－－１６收稿２０１１－０１—２０修网）（本文编辑李围琪）
