一种测定群体反应性抗体检测的板式免疫荧光试剂盒及其制备方法[

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 112710843 A(43)申请公布日 2021.04.27

(21)申请号 202011485684.0(22)申请日 2020.12.16

(71)申请人 江苏伟禾生物科技有限公司

地址 225300 江苏省泰州市经济开发区药

城大道一号新药创制基地二期D幢大楼912室(72)发明人 陈炤源　王浩　章婷婷　李天程　(74)专利代理机构 南京正联知识产权代理有限

公司 32243

代理人 卢霞(51)Int.Cl.

G01N 33/68(2006.01)G01N 33/58(2006.01)G01N 33/3(2006.01)

权利要求书3页 说明书10页

序列表4页 附图1页

()发明名称

一种测定群体反应性抗体检测的板式免疫荧光试剂盒及其制备方法(57)摘要

本发明公开了建立板式免疫荧光反应‑PCR仪检测的技术平台，提供一种测定群体反应性抗体检测的板式免疫荧光试剂盒及其制备方法，所述的试剂盒包括包被有抗原、抗体的96孔板和荧光素标记的抗体，检测仪器为荧光定量PCR仪。本发明板式免疫荧光反应‑PCR仪检测群体反应性抗体的方法及试剂盒，使用纯化后的HLA‑I类和HLA‑II类混合抗原，对样本进行快速筛选，通过荧光数值可以更准确的区分检出HLA‑I类和HLA‑II类抗体的反应，灵敏度高、特异性和重复性好。

CN 112710843 ACN 112710843 A

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1.一种测定群体反应性抗体检测的板式免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述的板式免疫荧光试剂盒的检测仪器为荧光定量PCR仪，

包括如下包装的成分：所述的板式免疫荧光试剂盒，

A.包被有抗原、抗体的96孔板，96孔分为反应孔、阳性质控孔、阴性质控孔，所述的反应孔中分别包被有如下成分：

1)HLA‑I类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的表达蛋白；所述的HLA‑I类抗原类型如表1所示；所述的HLA‑I类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的核苷酸序列如下表2中SEQ ID No.1‑SEQ ID No.11所示；

2)HLA‑II类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的表达蛋白；所述的HLA‑II类抗原类型如表1所示；所述的HLA‑II类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的核苷酸序列如下表2中SEQ ID No.12‑SEQ ID No.17所示；

所述的阳性质控孔中包被有人IgG；所述的阴性质控孔中包被有白蛋白；B.荧光素标记抗体；表1

表2 HLA‑I与II类混合抗原的特征性序列

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2.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光素标记抗体为兔抗人IgG多克隆抗体体。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光素为AlexaFluor‑7荧光素。

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一种测定群体反应性抗体检测的板式免疫荧光试剂盒及其制

备方法

技术领域

[0001]本发明涉及体外检测技术领域，具体涉及一种基于板式免疫荧光反应‑PCR仪检测的 技术平台，提供一种测定群体反应性抗体检测的板式免疫荧光试剂盒及其制备方法。背景技术

[0002]经过五十多年的发展，同种器官移植已经成为治疗各种器官组织性功能衰竭的根治方 法，随之而来的器官组织可能产生的排斥反应直接关系到临床移植是否成功。当受者的免 疫系统接触同种移植物上的异体抗原时，便会产生抗供者的免疫应答，供者体内的人类白 细胞抗原(HLA)肽会被递呈至T细胞和B细胞，经过一系列应答反应后，刺激介导急 慢

使移植失败或是降低移植物存活率。供受者双方 的HLA性排车反应的抗供者HLA抗体产生，

相容性越大，移植成功率越高。[0003]群体反应性抗体(panel reaction antibody，PRA)能够反映受者HLA抗原的致敏状态， 在移植前预测排斥反应和移植后预警移植物丧失，有效减少器官移植各种排斥反应的发 生，也是防止体液性排斥反应发生的最佳方法。PRA的研究始于19年Miescher首次发 现在多次输血的妇女血清中存在白细胞凝集抗体。1957年Payne发现妊娠妇女也有抗白细 胞抗体，后确认为抗HLA抗原的抗体。随着研究的逐步深入，PRA在体液免疫的作用才 逐渐得到重视，PRA分析也成为了移植物排斥反应是否存在免疫因素的重要标准。[0004]检测群体反应性抗体(PRA)是目前国内外评价抗HLA水平的通用方法，而国内主 要检测方法包括酶联免疫法与流式细胞法。酶联免疫法是将HLA抗原包被在专用Terasaki 微孔板中，将待测血清加入孔中与孔内已经包被的HLA抗原反应，再通过酶和底物作用 使其显色，用配套的Biotek酶标仪来判读结果。流式细胞法是将HLA单价抗原包被在不 同的微珠表面，将待测血清中特异性抗HLA抗体与包被在微珠表面的HLA反应结合，再 与标记荧光的二抗孵育反应，通过Luminex根据荧光强度进行结果的判读。第一种方法所 专用的Terasaki微孔板体积较小，并不适用于通用的酶标仪，要求实验室必须配套使用 Biotek酶标仪来判读结果，并且反应时间接近2h，耗时较久。第二种方法虽然反应缩短了 一半，并且特异性与灵敏度有所提高，但是对实验室要求较高，配套仪器价格昂贵。发明内容

[0005]本发明的目的是克服现有技术的不足，建立板式免疫荧光反应‑PCR仪检测的技术平 台，提供一种测定群体抗体检测的板式免疫荧光试剂盒及其制备方法，使用纯化后的 HLA‑I类和HLA‑II类混合抗原，对样本进行快速筛选，通过荧光数值可以更准确的区分 检出HLA‑I类和HLA‑II类抗原抗体的反应，灵敏度高、特异性和重复性好。[0006]本发明的技术方案如下：

[0007]本发明建立板式免疫荧光反应‑PCR仪检测的技术平台，提供一种测定群体反应性抗 体检测的板式免疫荧光试剂盒及其制备方法，所述的板式免疫荧光试剂盒的检测仪器

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为荧 光定量PCR仪，所述的板式免疫荧光试剂盒，包括包被有抗原、抗体的96孔板和荧光素 标记的抗体。[0008]其中，所述96孔分为反应孔、阳性质控孔和阴性质控孔。[0009]其中，反应孔中分别包被有如下成分：

[0010]1)HLA‑I类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的表达蛋白；所述的HLA‑I类抗 原类型如表1所示；所述的HLA‑I类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的核苷酸序列 如下表2中SEQ ID No.1‑SEQ ID No.11所示；

[0011]2)HLA‑II类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的表达蛋白；所述的HLA‑II类 抗原类型如表1所示；所述的HLA‑II类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的核苷酸 序列如下表2中SEQ ID No.12‑SEQ ID No.17所示；[0012]所述的阳性质控孔中包被有人IgG；[0013]所述的阴性质控孔中包被有白蛋白。[0014]表1 HLA抗原表

[0015]

[0016]

表1中HLA‑I和HLA‑II类抗原的编码基因是从IMGT/HLA检索得到。

[0018]HLA‑I和HLA‑II类抗原的编码基因的特征性优势序列的选择思路如下：通过 

排除无反应表位的基因片段。 DNAstar‑protean预测各个抗原蛋白的抗原决定簇反应表位，

再通过NetOGlyc和NetNGlyc对各个抗原蛋白的编码基因预测N‑糖基化位点和O‑糖基化 位点，排除含有N‑糖基化位点和O‑糖基化位点的反应表位的片段。由于HLA‑I、II类各 个抗原之间具有很高的同源性，在剩下的各个抗原蛋白的编码基因中选择抗原决定簇反应 表位同源性较高的片段作为HLA‑I类混合抗原、HLA‑II类混合抗原的特征性优势序列， 如表2所

[0017]

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示：

[0019]

表2 HLA‑I与II类混合抗原的特征性序列

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[0022]

其中，所述荧光素标记的抗体分为兔抗人IgG多克隆抗体。

[0024]其中，所述荧光素为AlexaFluor‑7荧光素。相比于传统荧光素，亮度与信号更强， 光稳定性更强，pH敏感性更弱，以及良好的水溶性。[0025]其中，所述检测仪器为荧光定量PCR仪为目前国内实验室普遍配备的仪器，荧光检 测数据稳定可靠，避免错读误读，减少漏诊误诊。[0026]其中，96孔盘中包被的抗原蛋白都是真核表达产物。传统的原核表达虽然能在短时 间内获得表达产物，方法比较简单，但是表达出来的蛋白产物没有经过修饰，不一定具备 天然的活性。真核表达的抗原蛋白抗原性、免疫源性和功能与天然蛋白，具备更好的特异 性和灵敏度，更好的被相应抗体识别。[0027]其中，试剂中的抗体都为兔源抗体，与传统的鼠源单抗相比，兔源抗体具有显著的优 势，包括特异性强、亲和力高。另外，兔源抗体具有独特的免疫系统，能够识别更丰富的 抗原表位。

[0028]本发明具有如下技术效果：由于HLA‑I类和HLA‑II类内的抗原非常多，导致所需检 测的因子也非常多。如果每个抗原都进行表达后混合包被、反应，包被抗原蛋白过多可能 造成相互干扰，影响抗体正常结合抗原的反应表位，可能造成HLA‑I类、HLA‑II类假阴 性。且由于HLA‑I类和HLA‑II类之间有一定同源性，可能也会造成交叉反应，造成HLA‑ I类、HLA‑II类假阳性。本发明通过筛选使用特征性优势序列，能够对样本进行快速筛选， 通过荧光数值可以更准确的区分出HLA‑I类和HLA‑II类抗体的反应，灵敏度高、特异性 和重复性好。

[0023]

附图说明

[0029]图1为96孔板各孔编号示意图。

具体实施方式

[0030]以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说 明和解释本发明，并不用于限定本发明。

[0031]实施例1筛选HLA‑I和HLA‑II类混合抗原的编码基因的特征性优势序列[0032]HLA‑I和HLA‑II类抗原的编码基因是从IMGT/HLA检索得到。

[0033]通过DNAstar‑protean预测各个抗原蛋白的抗原决定簇反应表位，排除无反应表位的 基因片段。再通过NetOGlyc和NetNGlyc对各个抗原蛋白的编码基因预测N‑糖基化位点 和O‑糖基化位点，排除含有N‑糖基化位点和O‑糖基化位点的反应表位的片段。由于 HLA‑I、II类各个抗原之间具有很高的同源性，在剩下的各个抗原蛋白的编码基因中选择 抗原决定簇反应表位同源性较高的片段作为HLA‑I类混合抗原、HLA‑II类混合抗原的特 征性优势序列，如表7所示：

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表7 HLA‑I与II类混合抗原的特征性序列

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[0036]

实施例2

[0038]特征性优势序列的蛋白表达具体过程如下：[0039]将设计好的特征性优势序列，由通用生物系统有限公司设计并合成引物，并在引物设 定中加入BamH I和Xho I(Takara公司)的酶切位点，进行PCR扩增反应，扩增产物使 用1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定。使用BamH I和Xho I酶切纯化的PCR产物和pcDNA3.1， 将凝胶电泳回收分离的目的基因和质粒pcDNA3.1(百欧博伟生物技术有限公司)经T4 DNA连接酶(Takara公司)16℃过夜连接反应，取少量连接物转化感受态细胞DH5α培 养过夜，转化菌

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涂布与100μg/ml氨苄西林的LB固体培养基(10g/L胰蛋白胨、5g/L酵母 提取物、10g/L氯化钠，pH＝7.4)平板上，37℃孵育。随机挑取单菌落扩大培养后提取重 组质粒，经过双酶切鉴定正确后进行序列测定。将重组质粒转染HEK293细胞，同时以空 载体质粒pcDNA3.1转染HEK293细胞，37℃、5％CO2条件下，恒温培养箱摇速120rpm 培养三天。4℃、2000r/min离心收集细胞培养上清。表达上清经过SDS‑PAGE电泳分离后， 以空载体转染的细胞培养上清作为阴性对照，对表发产物进行Western印迹鉴定。将表达 产物使用Ni‑NTA柱(GE公司)纯化，纯化后的表达产物使用Bradford法进行定量。[0040]各个特征性优势序列SEQ ID No.1‑17的蛋白表达具体过程也与上面过程基本相同， 具体操作方法属于本领域技术人员应该掌握的现有方法，在此不一一详述。[0041]实施例3[0042]将SEQ ID No.1‑17表达纯化后的蛋白样品倍比稀释至4μg/mL分别包被至Elisa酶标 板中，每个蛋白样品包被两个反应孔和对照孔，100μL/孔，4℃包被18h，200μL/孔洗液清 

μL对应 蛋洗两遍，120μL/孔封闭液37℃封闭1h,倒去封闭液，拍干。反应孔中依次加入100

白的HLA抗体阳性样本(SEQ ID No.1：A1阳性样本，SEQ ID No.2：A25阳性样本， SEQ ID No.3：A68阳性样本，SEQ ID No.4：B7阳性样本，SEQ ID No.5：B18阳性样本， SEQ ID No.6：C1阳性样本，SEQ ID No.7：C4阳性样本，SEQ ID No.8：C5阳性样本， SEQ ID No.9：C7阳性样本，SEQ ID No.10：C17阳性样本，SEQ ID No.11：C18阳性样 本，SEQ ID No.12：DR1阳性样本，SEQ ID No.13：DR4阳性样本，SEQ ID No.14：DQ2 阳性样本，SEQ ID No.15：DQ4阳性样本，SEQ ID No.16：DP1阳性样本，SEQ ID No.17： DP2阳性样本，样本稀释液稀释三倍)，对照孔中加入100μL的样本稀释液，室温(22‑28℃)， 300rpm，孵育30分钟。每孔加入200μL洗涤工作液，静置1分钟，拍干，重复5次后拍 干。加入100μL5000倍稀释HRP标记的羊抗人IgG(通用生物系统有限公司)，室温 (22‑28℃)，300rpm，孵育30分钟。每孔加入200μL洗涤工作液，静置1分钟，拍干， 重复5次后拍干。每孔加入100μLTMB显色液，室温下显色10min后加入100μL的2M的 硫酸终止液终止显色。结果如表3所示：[0043]表3纯化后蛋白样品的反应性

  1 2 3 4 5 6 7 8 9 A 0.968 1.176 1.027 0.932 0.933 1.017 1.084 0.9 1.092 B 0.974 1.174 1.002 0.957 0.903 1.026 1.114 0.906 1.082 C 0.055 0.062 0.067 0.068 0.068 0.073 0.073 0.068 0.06 D 0.063 0.063 0.07 0.066 0.073 0.062 0.07 0.066 0.063 E 0.947 1.009 0.948 0.867 0.908 1.041 1.039 0.886   F 0.944 0.94 0.951 0.9 0.921 1.053 1.095 0.862   G 0.0 0.065 0.065 0.0 0.066 0.072 0.069 0.062   H 0.057 0.061 0.072 0.062 0.057 0.061 0.057 0.066  

[0045]通过以上结果得知，SEQ ID No.1‑17表达纯化后的蛋白样品与对应的HLA抗体阳性 样本反应的信号较强，背景值低，具有良好的反应性。[0046]本实施例中，

[0047]洗液成分(3M磷酸盐缓冲液(pH7.5)，0.05％Tween‑20)；[0048]样本稀释液成分(100mM Tris‑Hcl、1500mM NaCl、0.05％Tween‑20)。

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实施例4

[0050]本发明的测定群体反应性抗体板式免疫荧光试剂盒，包括如下包装的成分：[0051](1)包被有抗原、抗体的96孔板，96孔分为反应孔、阳性质控孔和阴性质控孔。[0052]参照图1，96孔包被物分别如下：[0053]1A‑1H、2A‑2H、5A‑5H、6A‑6H、9A‑9F、10A‑10F为反应孔，孔中包被了实施例2 的方法制备的纯化后的HLA‑I类混合抗原的编码基因的特征性优势序列的表达蛋白(特征 性优势序列如SEQ ID No.1‑SEQ ID No.11所示，表达蛋白浓度各为4μg/mL)；[00]3A‑3H、4A‑4H、7A‑7H、8A‑8H、11A‑11F、12A‑12F为反应孔，孔中包被了实施例 2的方法制备的纯化后的HLA‑II类的混合抗原的编码基因的特征性优势序列的表达蛋白 (特征性优势序列如SEQ ID No.12‑SEQ ID No.17所示，表达蛋白浓度各为4μg/mL)；[0055]9G‑12G为阳性质控孔，孔中包被了4μg/mL人IgG(菲鹏生物股份有限公司)；[0056]9H‑12H为阴性质控孔，孔中包被了4μg/mL白蛋白(Sigma‑Aldrich)。[0057]包被方法如下：将96孔板置于37℃恒温包被2h。平衡至室温，洗液100μL清洗两次， 每孔中加入100μL5％BSA封闭液，37℃封闭0.5小时。甩干拍干后置于电子干燥箱中27℃ 干燥18h，，真空抽干封存于装有干燥剂的铝箔袋中备用。[0058](2)含有AlexaFluor荧光素标记抗体的磷酸缓冲液试剂，抗体分为兔抗人IgG多克 隆抗体(500倍稀释，通用生物系统有限公司)。[0059](3)浓缩磷酸盐洗液(3M磷酸盐缓冲液(pH7.5)，0.05％Tween‑20)。[0060] Tris‑Hcl、1500mM NaCl、0.05％Tween‑20)。(4)TBST样本稀释液(100mM

[0061]实施例5采用实施例4的试剂盒进行重复性检测的结果[0062]1实验方法[0063](1)用样本稀释液3倍稀释待测样本，反应孔中分别加入25μL稀释后的相同HLA‑I 类、HLA‑II类阳性样本(HLA I：1A‑1H、2A‑2H；HLAII：3A‑3H、4A‑4H)，阴性质控 孔和阳性质控孔中加入25μL的样本稀释液，室温(22‑28℃)，300rpm，孵育30分钟；[00](2)如用手动洗板，吸弃孔内液体，每孔加入100μL洗涤工作液，静置1分钟，拍 干，重复5次后拍干。如用全自动洗板机，自动洗板5次，完成后拍干。避免微孔间交叉 污染；[0065](3)反应孔、阳性质控孔和阴性质控孔中加入25μL的AlexaFluor荧光素标记的兔抗 人IgG多克隆抗体，室温(22‑28℃)，300rpm，孵育30分钟；[0066](4)重复(2)洗板；[0067](5)将96孔板置于荧光定量PCR仪的样品架中，进行测定，读取荧光信号值。[0068]本发明实施案例中的实施例2的结果如表4所示：[0069]表4检测结果

[0070]

  A B C D E F 1

478779 471156 4961 434218 467963 461319 2

277516 267797 275600 293913 297097 2946 3

4705 437937 457117 491311 470871 470297 4

2035 267447 295997 272677 280477 276315

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[0071][0072][0073]

G 478862 283982 467179 2131 173558 158574 175372 177252 H 461853 269590 4705 2035 7039 7073 528 6243 对以上同一样本不同孔间结果进行分析，分析结果如表5所示：表5重复性结果分析

  HLA‑I HLA‑II 平均值M 4669 278634 标准差SD 17292 12305 变异系数CV 3.71％ 4.42％

[0074]从这一结果可以看出，基于板式免疫荧光反应‑PCR仪检测的技术平台，测定群体反 应性抗体检测的板式免疫荧光试剂盒具有很好的重复性。[0075]实施例6采用实施例4的试剂盒进行符合性检测的结果[0076]1实验方法[0077](1)用样本稀释液3倍稀释待测样本，在反应孔中加入25μL稀释后的40例阳性样 本和40例阴性样本(参照试剂：One Lambda LATM)，阴性质控孔和阳性质控孔中加入 25μL的样本稀释液，室温(22‑28℃)，300rpm，孵育30分钟；[0078](2)如用手动洗板，吸弃孔内液体，每孔加入100μL洗涤工作液，静置1分钟，拍 干，重复5次后拍干。如用全自动洗板机，自动洗板5次，完成后拍干。避免微孔间交叉 污染；[0079](3)反应孔、阳性质控孔和阴性质控孔中加入25μL的AlexaFluor荧光素标记的兔抗 人IgG多克隆抗体，室温(22‑28℃)，300rpm，孵育30分钟；[0080](4)重复(2)洗板；[0081](5)将96孔板置于荧光定量PCR仪的样品架中，进行测定，读取荧光信号值，结 果如表6所示：

[0082]表6对比结果

[0083]

通过以上结果可以得出，对照试剂One Lambda LATM的40例阳性样本，本试剂盒检 

测出38例阳性，阳性符合率为95％。对照试剂One Lambda LATM的40例阴性样本，本 试剂盒检测出39例阴性，阴性符合率为97.5％。其中阴阳性样本检测结果不相符的阳性 样本为2份，阴性样本为1份，合计3份，总符合率为96.25％。[0085]最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于本发明，尽 管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以 对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡 在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的 保护范围之内。

[0084]

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序列表<110> 江苏伟禾生物科技有限公司<120> 一种测定群体反应性抗体检测的板式免疫荧光试剂盒及其制备方法<160> 17<170> SIPOSequenceListing 1.0<210> 1<211> 93<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 1

 ggcctgcagg ggatggaacc ttccagaagt gggcggctgt ggtggtgcct 60gtggagacca

tctggagagg agcagagata cacctgccat gtg 93<210> 2<211> 93<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 2gtggagacca ggcctgcagg ggatgggacc ttccagaagt gggcgtctgt ggtggtgcct 60tctggacagg agcagagata cacctgccat gtg 93<210> 3<211> 93<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 3gtggagacca ggcctgcagg ggatggaacc ttccagaagt gggtggctgt ggtggtgcct 60tctggacagg agcagagata cacctgccat gtg 93<210> 4<211> 105<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 4ccgtcttccc agtccaccgt ccccatcgtg ggcattgttg ctggcctggc tgtcctagca 60gttgtggtca tcggagctgt ggtcgctgct gtgatgtgta ggagg 105<210> 5<211> 105<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 5

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序　列　表

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ccatcttccc agtccaccat ccccatcgtg ggcattgttg ctggcctggc tgtcctagca 60gttgtggtca tcggagctgt ggtcgctact gtgatgtgta ggagg 105<210> 6<211> 108<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 6ccgtcttccc agcccaccat ccccatcgtg ggcatcgttg ctggcctggc tgtcctggct 60gtcctagctg tcctaggagc tgtggtggct gttgtgatgt gtaggagg 108<210> 7<211> 108<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 7ccgtcttccc agcccaccat ccccatcgtg ggcatcgttg ctggcctggc tgtcctggct 60gtcctagctg tcctaggagc tatggtggct gttgtgatgt gtaggagg 108<210> 8<211> 108<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 8ccatcttccc agcccaccat ccccatcgtg ggcatcgttg ctggcctggc tgtcctggct 60gtcctagctg tcctaggagc tgtgatggct gttgtgatgt gtaggagg 108<210> 9<211> 108<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 9ccatcttccc agcccaccat ccccatcatg ggcatcgttg ctggcctggc tgtcctggtt 60gtcctagctg tccttggagc tgtggtcacc gctatgatgt gtaggagg 108<210> 10<211> 126<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)

 10<400>

ccgtcttccc agcccaccat ccccaacttg ggcatcgttt ctggcccagc tgtcctggct 60gtcctggctg tcctggctgt cctagctgtc ctaggagctg tggtcgctgc tgtgatacat 120aggagg 126<210> 11

16

CN 112710843 A

序　列　表

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<211> 108<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 11ccgtcttccc agcccaccat ccccatcgtg ggcatcgttg ctggcctggc tgtcctggtt 60gtcctagctg tcctaggagc tgtggtggct gttgtgatgt gtaggagg 108<210> 12<211> 144<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 12aaggctgggg tggtgtccac aggcctgatc cagaatggag attggacctt ccagaccctg 60

 aaacagttcc tcggagtgga gaggtttaca cctgccaagt ggagcaccca 120gtgatgctgg

agtgtgacga gccctctcac agtg 144<210> 13<211> 144<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 13aagactgggg tggtgtccac aggcctgatc cagaatggag actggacctt ccagaccctg 60gtgatgctgg aaacagttcc tcggagtgga gaggtttaca cctgccaagt ggagcaccca 120agcctgacga gccctctcac agtg 144<210> 14<211> 84<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 14gtccggtggt ttcggaatga ccaggaggag acagctggcg ttgtgtccac cccccttatt 60aggaatggtg actggacctt ccag 84<210> 15<211> 84<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 15gtccggtggt ttcggaatga ccaggaggag acaactggcg ttgtgtccac cccccttatt 60aggaacggtg actggacctt ccag 84<210> 16<211> 93<212> DNA

17

CN 112710843 A

序　列　表

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<213> 人(Homo sapiens)<400> 16gaaatgaccc cccagcaggg agacgtctac atctgccaag tggagcacac cagcctggac 60agtcctgtca ccgtggagtg gaaggcacag tct 93<210> 17<211> 93<212> DNA<213> 人(Homo sapiens)<400> 17gaaatgaccc cccagcaggg agatgtctac acctgccaag tggagcacac cagcctggat 60

 ccgtggagtg gaaggcacag tct 93agtcctgtca

18

CN 112710843 A

说　明　书　附　图

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图1

19