牛奶的全分析

再逐滴小心加入6 mol·L-1HCl，至CaCO3完全溶解，定量转入100mL容量瓶中，以水稀释至刻度，并计算其浓度。 10、NaOH（5 mol·L-1） 11、HCl（6 mol·L-1） 12、三乙醇胺(200g·L-1) 13、铬蓝黑R(5 g·L-1)乙醇溶液 （三）仪器

试管、移液管（1mL、5mL、20 mL）、、 l0mL容量瓶、烧杯、表面皿、250mL锥形瓶、1000mL棕色试剂瓶、25mL具塞比色管、试管架、坩埚、60mL分液漏斗

水浴箱、可见光分光光度计、离心机、抽滤装置、精密pH试纸（可测pH4.7），酸度计、电炉、温度计 四、操作步骤

（一）牛奶中酪蛋白的提取 1、酪蛋白的粗提

50mL鲜牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液50mL用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r ·min-1）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 2、酪蛋白的纯化

用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r·min-1），弃去上清液。在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。 3、准确称重，计算含量和得率

含量：酪蛋白g/(100 mL)牛乳

得率

提取得到的含量

100%

真实含量

3/5

（二）酪蛋白含量的测定 1、标准曲线的绘制与样品的测定

取试管8支，按下表操作。

各管混匀、放置37℃水浴中保温20min。540nm比色，以空白管调零点，读取各管吸光度值。 2、计算

在电脑上以吸光度值为纵坐标，以蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。从标准曲线中查出待测样本的蛋白质浓度(g／L)，并求出牛奶中蛋白质浓度。由此浓度计算出100mL鲜牛奶中酪蛋白的真实含量。 （三）钙含量的测定 1、EDTA溶液浓度的标定

准确移取20.00mL CaCO3标准溶液3份分别于250mL锥形瓶中，加入2mL NaOH溶液，铬蓝黑R指示剂3~4滴，用EDTA溶液滴定至溶液由红色变为蓝色即为终点，根据滴定用去EDTA毫升数和CaCO3标准溶液的浓度，计算EDTA溶液的浓度。

2、钙制剂钙含量的测定

准确移取一定量的鲜牛奶和钙奶，分别转移到100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

准确移取上述试液20.00mL，加入三乙醇胺溶液5mL，5mol·L-1NaOH 4mL，加入水20mL，摇匀，加铬蓝黑R3~4滴，用0.01mol·L-1EDTA标准溶液滴定，接近终点时再补加2～3滴铬蓝黑R，当溶液由红色变为蓝色即为终点，根据消耗EDTA的体积，计算出鲜奶和钙奶中钙的含量（g/100 mL），并与包装上注明的含量作比较。 3、注意事项

4/5

量取鲜奶和钙奶的量视钙含量多少而确定，以消耗0.01 mol·L-1EDTA体积为20~30 mL。牛奶、由于钙奶均为乳白色，终点颜色变化不太明显，接近终点时再补加2～3滴指示剂。 思考题

1、了解蛋白质及钙、铁、锌等微量元素与人体健康的关系

3、本实验中哪些物质质量需要准确称量，哪些溶液体积需要准确量取？ 4、除本实验选用的方法外，测定蛋白质与钙还有那些方法？