第29卷第5期 2013年lO月 文章编号:1674—0874(2013)05—0054—04 山西大同大学学报(自然科学版) Journal of Shanxi Datong University(Natural Science) V01.29.No.5 0ct 2013 2种缓冲液对血清蛋白醋酸纤维膜电泳效果对比研究 于婧文 ,霍明章 一,李艳花 ,赵立峰 ,刘 宏 ,z (1.山西大同大学医学院,山西大同037009;2.山西大同大学呼吸病与职业病研究所,山西大同037009) 摘要:目的在血清蛋白醋酸纤维膜电泳巴比妥缓冲液可以分离出5条区带的实验条件下,研究硼酸一硼酸 盐缓冲液是否能够达到相同甚至更好的实验效果,是否可替代巴比妥缓冲液。方法采用DYY一8C型电泳仪进行醋 酸纤维膜电泳,选择不同电压和电泳时间,观察巴比妥缓冲液与硼酸一硼酸盐缓冲液分离兔血清蛋白的效果,并分 析2组蛋白质相对含量测定值有无差异。结果在相同的实验条件下,硼酸盐缓冲液的分离效果好于巴比妥缓冲液,2 组蛋白质相对含量无明显差异。结论在血清蛋白醋酸纤维膜电泳实验中,与巴比妥缓冲液相比,硼酸缓冲液的实验 结果更稳定且重复性更好,可以替代巴比妥缓冲液。 关键词:巴比妥缓冲液;硼酸盐缓冲液;醋酸纤维膜电泳 中图分类号:0657.1 文献标识码:A 血清蛋白醋酸纤维膜电泳是生物化学与分子 生物学的常用实验技术之一。巴比妥缓冲液是血清 蛋白醋酸纤维膜电泳实验中最常用的缓冲液,但作 为镇静类药物其可得性受到限制,安全性存在隐 患。本研究在巴比妥缓冲液能够清晰分离出5条区 带的4组实验条件下,观察硼酸盐缓冲液是否也 能够分离出理想的图谱,并测定这2种缓冲液在 不同实验条件下分离出的蛋白相对含量,判断其实 V无水乙醇:V冰醋酸:V蒸馏水=45:5:50;洗脱 液,0.4 mol/L NaOH。 2 方法 参照生物化学与分子生物学实验指导方法【 I进 行。将醋酸纤维膜剪成2.5 cmx8 cm的长方形小 片,浸泡到上述2种缓冲液中过夜待用。 2.1点样 验结果的差异,从而探讨在血清蛋白醋酸纤维膜电 泳实验中,硼酸缓冲液是否可以替代巴比妥缓冲液。 取浸泡好的醋酸纤维膜,夹于滤纸中吸去多余 缓冲液,在无光泽面一端1.3 cm处画点样线,用载 1 实验材料 1.1标本 玻片一端均匀蘸取少量血清垂直点样,使血清均匀 渗入薄膜中同时保持醋酸纤维膜的润湿。 2.2电泳 新鲜兔血清,取自1只健康家兔,体质量2.8 kg, 采其动脉血离心得血清。 1.2仪器 每台电泳仪连接分别装巴比妥缓冲液和硼酸 盐缓冲液的2个电泳槽,4台电泳仪共连接8个电 泳槽。将点样后的醋酸纤维膜无光泽面向下,点样 端靠近阴极,两端紧贴电泳槽上的纱布桥,拉直放 好,每个电泳槽放置12条点样后的醋酸纤维膜, 盖好电泳槽,平衡10 min后分别选择电压和电泳 时间,打开开关,通电电泳。 2.3染色及漂洗 DYY一8C型电泳仪4台、DYCP一38B型电泳槽 8个(北京六一仪器厂),722型分光光度计。 1.3试剂 醋酸纤维薄膜(台州市路桥四生化塑料厂);巴 比妥缓冲液(pH 8.6,离子强度0.06):巴比妥1.66 g, 巴比妥钠12.76 g,加热溶解,冷却至室温后,定容 到1 L;硼酸盐缓冲液(pH 8.6,离子强度0.08):硼 酸5.60 g,硼酸钠5.610 g,氯化钠1.316 g,蒸馏水 丽春红染液染色5 min后取出用漂洗液漂洗数 次,直至背景漂净为止。 2.4定量 溶解并定容至1 L;丽春红染液,丽春红0.5 g,三 氯醋酸6 g,蒸馏水溶解并定容至100 mL;漂洗液, 收稿日期:2012—08—08 分别取各实验条件下的电泳效果较好的醋酸 纤维薄膜各6条,将蛋白质各条色带和一空白色带 作者简介:于婧文(1984_),女,山西左云人,硕士,助理实验师,研究方向:生物化学教学与实验。 刘宏,男,博士;教授,通信作者。 山西大同大学学报(自然科学版) 2013年 3-2 2种缓冲液洗脱各组分蛋白的结果 - 图8 160V一45min硼酸盐缓冲液 比色测定两种缓冲液下分离出的各蛋白区带 的相对含量取其平均值,见表2。 4 结论 电压与电泳时间是影响电泳结果的重要因素 之一。在4组实验模式下,硼酸盐缓冲液同巴比妥 缓冲液一样都能分离出5条蛋白区带。在160 V一 45 min条件下,两组图谱展开距离短,除清蛋白 表1 两种缓冲液电泳情况的比较 电压和时间 巴比妥缓冲液/cm 最远区带与最近区带距离硼酸盐缓冲液/em 最远区带与点样线距离最远区带与最近区带距离最远区带与点样线距离 实验条件 巴比妥缓冲液/% 硼酸盐缓冲液/% 清蛋白0【l一球蛋白仪2一球蛋白p一球蛋白 一球蛋白清蛋白0【1一球蛋白d2一球蛋白p一球蛋白 一球蛋白 外,其它蛋白条带挤压,区带变细不利于区分。 2种缓冲液的离子强度不同,蛋白迁移速度也 不同。硼酸盐缓冲液的离子强度高,可能降低了蛋 白质的带电量,使电泳的速度变慢,故4组实验模 式下硼酸盐缓冲液的区带较集中,最远区带与点样 缓冲液与巴比妥缓冲液在分离各组分蛋白的含量 方面差异没有显著性。 综上所述,在相同实验条件下,硼酸盐缓冲液 同巴比妥缓冲液一样能够分离出清晰的图谱,甚至 效果要好于巴比妥缓冲液。统计分析测定各组分蛋 点的距离较短。实验表明在不同的实验条件下硼酸 盐缓冲液能够得到清晰的图谱甚至分离效果好于 巴比妥缓冲液,而且实验的重复性和稳定性更好。 实验结果与靳彩虹测定兔血清蛋白含量结果嘲 基本一致:清蛋白含量> 一球蛋白>oll一球蛋白> 白质的相对含量,2种缓冲液差异没有显著性。多 次重复实验证明,与巴比妥缓冲液相比,硼酸盐缓 冲液中电泳出的图谱结果更稳定,重复性更好,而 且成本较低,能够替代巴比妥缓冲液,更适合在生 物化学与分子生物学实验中使用。 B一球蛋白>or2一球蛋白。统计学结果说明,硼酸盐 参考文献 【1】李林,张月红,张宇辉,等.生物化学与分子生物学实验指导[M】.北京:人民卫生出版社,2008. [2]孙莉丽,李荣华.醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验的改进[J].实验室科学,2010,13(2):58—59. 【3]陈书明,曹新鹏,胡军,等.6种血清的醋酸纤维薄膜电泳分析【JJ.山西农业科学,2010,38(6):18—20. 【4】尹丽,陈秀敏,王永和,等.血清蛋白醋酸纤维膜电泳几种缓冲液的效果分析【JJ.中国医学创新,2010,7(11):145—146 【5]靳彩虹,柴连明,武洋.醋酸纤维素薄膜电泳法分离兔血清蛋白质[J1.中国卫生检验杂志,2012,22(11):2649—2650. 2013在 于婧文等:2种缓冲液对血清蛋白醋酸纤维膜电泳效果对比研究 57・ The Effect Separating Serum Protein with Cellulose Acetate Membrane Electr0ph0resis in Two Buffer Solution YU Jing—wen ,HU0 Ming-zhang 一,LI Yan-hua ,ZHA0 Li-feng ,LIU Hong ’ (1. Medical School,Shanxi Datong University,Datong Shanxi,037009; 2.Research Institute of Respiratory and Occupational Disease,Shanxi Datong University,Datong Shanxi,037009) Abstract:0bjeefive Boric acid—borate buffer can achieve the same or even better experimental effect in the experimental conditions that barbiturate buffer can separate out five ribbons in seFum protein cellulose acetate membrane eleetrophoresis.Methods Using DYY一8C electrophoresis apparatus for cellulose acetate membrane electrophoresis,choosing different voltage and time,the effect separating rabbit seillm protein is observed in barbiturate buffer and boric acid—borate buffer.And the relative content of protein components is measured.Results Under the same experimental conditions,the effect separating serum protein in borate saline buffer is better than in barbiturate buffer.There is no difference between the two kinds of buffer.Conclusions In seIMm protein cellulose acetate membrane electrophoresis,the boric acid—borate buffer can replace barbiturate buffer.and many experiments prove that:the experimental results of boric acid—borate buffer is more stable and repeatability is better than barbiturate buffer. Key word:Boric acid—borate buffer;Barbiturate buffer;Cellulose acetate membrane electrophoresis [责任编辑杨德兵] (上接第40页)卜”—+-一—卜一—+-一—-卜一+”+ 一—+一*—・卜-—●一-——卜-—+一-—+一一——卜一—+一-—+一一—+一*—+一一—+一-—+一一—+一*—+一-—+一-—叶一-+-+一+一+-+一+-+*+-+-+-+ 参考文献 [1]曾谨言.量子力学,(卷Ⅱ)【M】.北京:科学出版社,2000. [2]喀兴林.高等量子力学【M】.北京:高等教育出版社,2001. [3]Goldenberg L,Vaidman L.Quantum Cryptography Based on Orthogonal States Phys Rev Lett,1995(75):1239. [4]Koashi M,Imoto N.Quantum Cryptography Based on Split Transmission of One—Bit Information in Two Steps 】.Phys Rev Lett, 1997(79):2383. 【5]Beige A,Englert B G,Kuasiefor C,et a1.Secure communication with a publicly known key叨.Acta Phys Pol A,2002,101(6):357. 【6]Beige A,Englert B G,Kunsie ̄r C,et a1.Secure communication with single-photon two—qubit states[J].Phys A:Math Gen。2002 (35):407—413. 【7]Bostrom K,Felbinger T.Determinstic secure direct communication using entanglement[J】.Phy Rev Lett,2002,89(1 8):1 87902. 【8]Cai Q Y.The”Ping—Pong”protocol can be attacked without eavesdropping【J1.Phys Rev Lett,2003,91(10):109801. [9]Cai Q Y.Eavesdropping on the two-way quantum communication protocols with invisible photons叨.Phys Lett A,2006(35 1):23—25. [10]Bemlett C H,Wiesner S J.Communication via one and two particle operators on Einstein—Podolsky—Rosen states Phys Rev Lett,1992(69):2881—2884. [1 1]Cai Q Y,Li B W.Improving the capacity of the Bostrom—Felbinger protocol【J].Phys Rev A,2004(69):054301. 【12]Bourdon P S,Gerjuoy E,McDonald J P,et a1.Deterministic dense coding and entanglement entropy【JJ.Phys Rev A,2008(77): 022305. [13]Li L W,Li C F,Guo G C.Pro babilistic telepo rtat ion and entanglement matching【JJ.Phys Rev A,2000(61):034301—034303. Two—。way Quantum Communication Protocol based on Non-maximally Entangled States xu Nan,HU Zhang-ning,LIAN Wen-juan (School of science,Tianjin Polytechnic University,Tianjin,300387) Abstract:This paper proposes new idears for quantum cryptography with a nonmaximally entangled.In a two—way configuration similar to quantum super dense coding,a two-bit key can be distirbuted by one particle of the qubit pair,The security of our scheme is based on the quantum—mechanical impossibility of local unitary transformation between certain nonmaximally entangled states.A1一 though an eavesdropper,Eve,can always identi ̄the quantum state and intercept the key,it is impossible for her to resend the state and the legitimate parties Can inevitably detect her.Our protocol is also capable to quantum secure direct communl‘cati0n. Key words:quantum cryptography;quantum communication;non—maximally entangled state;security [责任编辑李海]