维普资讯 http://www.cqvip.com ＮＯＶ．２００７ ・ 生物加工过程 ６０・ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ 第５卷第４期 ２００７年１１月 从酿酒酵母中分离纯化谷胱甘肽 林志兴，吕永琴，丁 轲，周 鑫，谭天伟 （北京化工大学 生命科学与技术学院生物加工过程重点实验室，北京１０００２９） 摘要：为了提高酵母发酵生产谷胱甘肽的提取率，采用热水直接抽提的方法，并通过正交实验优化及单因素实验 优化，得到优化条件：鲜酵母的质量与去离子水体积的比例为１：１２；抽提温度９０ｏＣ；搅拌转速３５０ ｒ／ｍｉｎ；＂３抽提液 －温度达到９０℃就停止抽提，并进行了热水抽提的放大实验。同时在抽提时加氮气保护。防止ＧＳＨ部分氧化。抽提 液离心除菌泥，经截流相对分子质量为１０ 的超滤膜超滤后，除去大量杂蛋白，便于后续ＧＳＨ的精制分离。通过对 饱和操作吸附容量及解吸得率的研究，确定强酸型阳离子交换树脂Ｄ０６１为分离介质。 关键词：谷胱甘肽；正交实验；优化；超滤：离子交换树脂 中图分类号：ＴＱ０２８．８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—３６７８（２００７）０４—００６０—０５ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｆｒｏｍ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＬＩＮ Ｚｈｉ—ｘｉｎｇ，ＬＶ Ｙｏｎｇ—ｑｉｎ，ＤＩＮＧ Ｋｅ，ＺＨＯＵ Ｘｉｎ，ＴＡＮ Ｔｉａｎ—ｗｅｉ （Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）ｉｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｙｅａｓｔ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｇｅｔ ｈｉｇｈｅｒ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ＧＳＨ．Ａｆ－ ｔｅｒ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｂｒｏｔｈ，ｔｈｅ ｆｌｅｓｈ ｙｅａｓｔ．Ａ ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｗｉｔｈ ｈｏｔ ｗａｔｅｒ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｇａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ９０℃，１２ ｍＬ／ｇ，３５０ ｒ／ｍｉｎ，ａｎｄ ｓｔｏｐｐｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｒｅａｃｈｅｄ ９０ ｏＣ，ａｎｄ ａ ｌａｒｇｅｒ ｓｃａｌｅ ｗａｓ ｐｒｏｃｅｅｄｅｄ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ ｉｔ ｗａｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｔｏ ｐｒｏｔｅｃｔ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｗｉｔｈ Ｎ２ ｆｒｏｍ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｅｎｔｉｆｆｕｇａｔｅｄ，ｔｈｅｎ ｕｌｔｒａ—ｉｆｌｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｏｆ １０ Ｋ ＭＷＣＯ（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔ—ｏｆｆ）ｔｏ ｒｅ— ｍｏｖｅ ｔｈｅ ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ａｆｔｅｒ ｔｈｉｓ ｓｔｅｐ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ．Ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ，Ｄ６０１ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｒｅｓｉｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ：ｏ￣ｈｏｇｏｎａｌ—ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；ｏｐｔｉｍｉｚｅ；Ｕｌｔｒａ—ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ；ｉｏｎ—ｅｘｃｈａｎｇｅ；ｒｅｓｉｎ 谷胱甘肽（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）是谷氨酸、甘氨酸 中。经研究发现还原型的谷胱甘肽在生物体内有 和半胱氨酸组成的具有重要生理功能的天然活性 三肽，在自然界中以氧化型（ＧＳＳＧ）和还原型 （ＧＳＨ）的形式广泛存在于动物、植物和微生物细胞 着重要的生理功能 ，谷胱甘肽在临床应用上作 为重要的解毒药物，在肿瘤，眼角膜病治疗，抑制艾 滋病病毒等方面应用广泛 Ｉ４ ，同时在食品添加剂、 收稿日期：２００６—１２—１８ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（２０３２５６２２，２０５７６０１３，５０３７３００３）；博士点基金资助项目（２００３００１０００４）；国家“十五”攻关资助项 目（２００４ＢＡ４１１Ｂ０５） 作者简介：林志兴（１９８１一），男，山东蓬莱人，硕士研究生，研究方向：生物分离。 联系人：谭天伟，教授，博士生导师，教育部长江学者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｔａｎｔｗ＠ｍａｉｌ．ｂｕｃｔ．ｅｄｕ．ＣＨ． 维普资讯 http://www.cqvip.com ２００７年１ １月 林志兴等：从酿酒酵母中分离纯化谷胱甘肽 ・ ６１ ・ 化妆品和运动营养学中的应用也成为研究热点。 离心（４８００ ｒ／ｍｉｎ，８ ｍｉｎ）——上清液超滤（截流相 对分子质量１０ ）——谷胱甘肽澄清液——离子交 ＧＳＨ的生产方法主要有直接溶剂萃取法 、发酵 法 ］、酶法 及化学合成等４种方法，目前主要以 酵母发酵法制取，也最具发展潜力，口本和欧洲一 些国家已实现了工业化生产，但国内一直末实现工 业化，主要难题是谷胱甘肽的分离纯化。在日本有 沸水提取的相关报道 －９］，国内周楠迪等¨叫对热水 抽提进行了研究，发现热水提取在９５～１００ ｃＩＣ之问， 抽提１０ ｍｉｎ，收率达到９０％；安贤惠等“一 也使用 多种抽提方法进行了研究，都认为热水提取在不超 过９５ｃＩＣ时，提取率高，耗时短，经济且无污染，但只 是研究初步提取ＧＳＨ，尚未建立一条工艺路线。目 前在工业生产中仍采用混合有机溶剂的方法来提 取，该方法时间长，溶剂用量大，成本较高¨ 。本文 对热水抽提条件进行了正交优化及单因素优化，得 到了最佳的热水抽提条件，并进行了热水抽提放大 实验，放大实验结果显示本实验所采用的热水抽提 无放大效应，可应用于工业化生产。 １材料与方法 １．１材料与仪器 １．１．１材料 酿酒酵母菌体，本实验室发酵组提供。 １．１．２仪器 Ａｌｌｔｅｃｈ高效液相色谱（美国Ａｌｈｅｃｈ公司）；超 滤杯（中科膜技术公司）；台式离心机（上海安亭科 学仪器厂）；ＷＦＺ ＵＶ－２０００紫外可见分光光度计（尤 尼柯（上海）仪器有限公司）。 １．２方法 １．２．１谷胱甘肽分析方法 采用高压液相色谱法 ，并经本实验室改进。色 谱柱：Ｃ， ２５０ｍｍ×４．６ ｍｍ加保护柱；流动相：缓冲液 Ａ：０．１％ＴＦＡ，Ｈ２Ｏ；缓冲液Ｂ：０．１％ＴＦＡ，ＣＨ３ＣＮ；缓 冲液Ｃ：Ｖ（Ａ）：Ｖ（Ｂ）＝９６．２５：３．７５；柱温：２９．８ ｃＩＣ；流 速：０．８ ｍＬ／ｍｉｎ；紫外检测器检测波长：２１４ ｎｍ。 １．２．２蛋白质含量测定 Ｂｒａｄｆｏｒｄ检测法 。 蛋白质含量测定采用分光光度法检测５９５ ｎｍ 的光吸收值大小计算蛋白质含量，用牛血清白蛋白 作为标准蛋白。 １．２．３工艺流程 酵母菌体——热水抽提——调ｐＨ至３．０—— 换法分离谷胱甘肽。 １．２．４热水抽提 称取一定质量的新鲜酵母菌与定量的去离子 水混合，在一定的条件下进行抽提，迅速冷却至室 温，测定上清液中ＧＳＨ的含量。 （ａ）去离子水体积倍数的单因素优化 实验采取了６个不同的水平，即取１ｇ鲜酵母分 别加入３ ｍＬ、５ ｍＬ、８ ｍＬ、１０ ｍＬ、１２ ｍＬ、１５ ｍＬ的煮 沸的去离子水，其他条件固定为：抽提温度９０ ｃＣＩ，搅 拌转速３５０ ｒ／ｍｉｎ，抽提液刚达到抽提温度即停止继 续抽提，离心取上清液测定其ＧＳＨ含量。 （ｂ）抽提温度的单因素优化实验 抽捉温度取８５、９０、９４、９６、９８ ｃＩＣ ５个不同的水 平，其他条件固定为：１ ｇ新鲜酵母菌，１２ ｍＬ煮沸的 去离子水，搅拌转速３５０ ｒ／ｍｉｎ，抽提液刚达到抽提 温度即停止继续抽提，离心取上清液测定其ＧＳＨ 含量。 １．２．５正交实验方法 实验采用了如表ｌ所示的以每克新鲜酵母中的 ＧＳＨ抽提量为评价指标的４因素４水平的正交实 验，详细考察了抽提温度、抽提时间、去离子水体积 倍数以及搅拌转速对抽提效率的影响。 表１ 热水抽提ＧＳＨ的４因素４水平正交设计表 Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｃｈａｒｔ ｏｆ ｆｏｕｒ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｆｏｕｒ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＧＳＨ ｂｙ ｈｏｔ ｗａｔｅｒ 注：此处抽提时间是从抽提液温度达到设定的抽提温度 起计算的时间，故０ ｒａｉｎ指抽提液刚达到抽提温度即停止继 续抽提 １．２．６抽提过程的Ｎ 保护措施 实验过程中为了防止抽提过程中ＧＳＨ的氧化， 对有无Ｎ 保护的抽提条件进行对照研究。 １．２．７热水抽提的放大实验 取２ ｋｇ菌体按照最佳抽提条件进行抽提，计算 维普资讯 http://www.cqvip.com ・ ６２ ・ 生物加工过程 第５卷第４期 ＧＳＨ回收率。 酵母细胞内的ＧＳＨ就会停止释放，因而在一定范围 内增加水体积可以不断提高ＧＳＨ从酵母内释放的 总量，但当水体积增大到足够大时，ＧＳＨ的释放总 量将不再增加，此时ＧＳＨ抽提的得率达到最大，对 应的水体积与酵母质量之比为１２。所以在菌体破 碎抽提时去离子水体积与酵母质量之比为１２。 ２．１．２抽提温度的单因素优化 图２中可以看出随着抽提温度的升高，从单位 １．２．８超滤实验方法 采用截留相对分子质量为３×１０ ，６×１０ ，１０ ， ３×１０ ，６×１０ 的聚砜纤维膜过滤离心得到的上清 液，记录超滤所用的时间、测定过滤液中ＧＳＨ浓度 和杂蛋白浓度，从中选择一个合适的截留相对分子 质量的膜。 １．２．９谷胱甘肽稳定性实验 用ＧＳＨ纯品配制浓度为５ ｍｍｏｌ／Ｌ的溶液，各 取３０ ｍＬ分别用浓ＨＣ１调ｐＨ值至１．９３，２．９０， ４．０３，５．０１，５．９７，６．９５，８．９８，１１．００；在２０～２５℃室 温下，敞口放入水浴振荡器中以５０ ｒ／ｍｉｎ轻微晃 动，开始计时；在０，１，３，６，１０，１５，２１，２８，３６，４６ ｈ分 别取样测定不同ｐＨ值的ＧＳＨ溶液中的ＧＳＨ浓度。 １．２．１０分离介质的选择与确定 在ｐＨ ４．０下吸附谷胱甘肽，５％的ＮａＯＨ溶液 解吸谷胱甘肽。比较各种树脂的操作吸附容量和 解吸得率，确定合适的分离介质。 ２结果与讨论 ２．１ 热水抽提正交实验及单因素实验结果与讨论 实验采用了以每克新鲜酵母中的ＧＳＨ抽提量 为评价指标，通过单因素实验详细考察了抽提温 度、抽提时间对抽提效率的影响，并通过４因素４水 平的正交实验，考察了抽提温度、抽提时间、去离子 水体积倍数以及搅拌转速对抽提效率的协同影响。 ２．１．１ 去离子水体积的单因素优化 由图１可以看出随着水体积倍数的提高，酵母 细胞释放出来的ＧＳＨ越多，因而抽提效果也就越 好。推断其原因是抽提过程中酵母细胞内外的 ＧＳＨ浓度存在某种平衡。当ＧＳＨ浓度达到平衡时， 金 （力 图１去离子水体积优化 Ｆｉｇ．１ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ ｗａｔｅｒ 质量酵母中提取到的ＧＳＨ量先增大后减小，在９０ ℃下达到最大值。这说明温度在一定范围内升高 由于增加了细胞壁的通透性，有利于ＧＳＨ从胞内向 外释放。由于ＧＳＨ对温度敏感，在温度继续增加的 情况下，ＧＳＨ易氧化或分解，故抽提的ＧＳＨ的总量 会下降，所以抽提温度不应过高。通过优化得出， 最佳的抽提温度为９０℃。 ＾＼士 （力 ０ 图２抽提温度优化 Ｆｉｇ．２ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ２．１．３正交优化的结果进行极差分析 由表２极差 可以看出，４个因素对抽提浓度 指标影响的主次顺序为因素Ｃ的影响最大，以因素 Ａ与Ｄ的影响相当，因素Ｂ的影响最小，故根据极 差分析确定最佳的热水抽提条件：鲜酵母的质量与 去离子水体积的比例为１：１２；搅拌转速为３５０ ｒ／ｍｉｎ 时接近Ｄ因素的最佳状态；抽提温度取９０℃；至于 抽提时间，由于极差值相对最小，其趋势不太明显， 仍然只选择抽提液刚达到９０℃即停止继续抽提。 ２．２热水抽提放大实验 热水抽提具有操作简便，提取率高，成本低，无 污染等优点，为了将该方法应用于工业生产，取２ ｋｇ 的鲜酵母菌体，应用已得到的热水抽提条件进行放 大实验，实验结果如表３所示，ＧＳＨ的收率为 ９０．７％。实验结果表明热水抽提的放大效应不明 显，适宜工业化放大生产。 维普资讯 http://www.cqvip.com ２００７年１１月 林志兴等：从酿酒酵母中分离纯化谷胱甘肽 ・ ６３ ・ 表２正交实验结果 Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ—ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ／（墨∽０ ０ ０ ５ ０ 表３ 热水抽提试验放大结果 Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｏｔ ｗａｔｅｒ ｉｎ ａ ｌａｇｅｒ ｓｃａｌｅ ２．３抽提过程氮气保护措施 结果如图３所示，有Ｎ 保护的抽提较没有Ｎ 保 护的抽提的效果好，表明在抽提过程中的确会有少 量ＧＳＨ发生氧化，所以抽提过程中加以氮气保护可 以防止部分ＧＳＨ被氧化，从而提高抽提得率。 肌 ０．４５５ ０．４５０ ２ ２ ２ ２ ０ ８ ６ ５ ７ ２ １ ９ ８ ８ ７ ３ ８ ３ ３ ５ ２ ２ ２ ２ ０ ７ ６ ６ ７ ０ ３ ７ ９ ２ ５ ７ ８ ３ ３ ９ ０．４３５ ２ ２ ２ ２ ０ ６ ４ ４ ７ １ ８ １ ８ ５ ３ ０．４３０ ０ ５ ５ ０ ５ ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｂｙ Ｎ２ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｂｙ Ｎ２ 方式 ２ ２ ２ ２ ０ 图３有无氮气保护的抽提效果比较 ７ ４ ８ ９ ５ ２ ６ ５ ２ ０ ５ ５ ０ ０ Ｆｉｇ．３ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｂｙ Ｎ２ ２．４超滤实验结果 菌体破碎经离心除菌泥后，上清液中有少量残存 的菌泥以及大量的水溶性蛋白，为了后续的精制分 离，需将上清液进行超滤以除去这些杂质。从图４可 以看出随着截流相对分子质量的增加，滤过液中ＧＳＨ 的含量呈现递增趋势，但当膜截留相对分子质量为 １０ 时，再增加膜截留相对分子质量，对ＧＳＨ的透过 无明显改善，这表明当截留相对分子质量为１０ 时， ＧＳＨ已经可以自由透过了；而在截流相对分子质量大 于１０ 的超滤膜滤过液中杂蛋白的含量突然猛增，这 是由于膜的截流相对分子质量逐渐增大，能通过膜的 杂蛋白迅速增多所引起的。考虑到应尽可能多地去 除杂蛋白，并且能保持很高的ＧＳＨ透过率，超滤时应 选择截流相对分子质量为１０ 的膜。 ， ● ＾、 图４不同截留相对分子质量的超滤膜超滤 ＧＳＨ抽提液对比 Ｆｉｇ．４ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ＧＳＨ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ２．５谷胱甘肽稳定性实验 ＧＳＨ容易氧化，当它与树脂发生吸附作用时需 维普资讯 http://www.cqvip.com ・６４・ ５ ５ 生物加工过程 ｒ１．＿１０ｇｇ一，（｝王∽０ ４ ５ 第５卷第４期 要选择一个最佳的ｐＨ值。考查ＧＳＨ稳定条件，以 ５ ５ ３ ２ １ ５ Ｏ ５ 态，可与树脂发生交换吸附。离子交换树脂中强酸 便于选择ＧＳＨ与树脂发生吸附作用时的最佳ｐＨ 值，使得ＧＳＨ在此ｐＨ下较为稳定而不易被氧化，从 而保证ＧＳＨ充分与树脂发生作用。实验结果如图 ５，当ｐＨ值＞５时，ＧＳＨ含量随时问的增加而减小， ｐＨ值越大，趋势越明显。在ｐＨ２．０—４．０范围内， ＧＳＨ在室温下于４６ ｈ后其检测量仍可稳定在９０％ 左右，因此选择在这个范围内的ｐＨ值下进行ＧＳＨ 性阳离子交换树脂Ｄ０６１的解吸得率最高，为 ７５．２％，所以在ＧＳＨ精制纯化时采用强酸性阳离子 交换树脂Ｄ０６１。 ３结论 通过正交优化及单因素优化得到最佳的热水 吸附实验。 ｔ／ｈ 一＊－ｐＨ１．９３一ｐＨ２．９０…ｐＨ４．０３一ｐＨ５．Ｏ１ 一ｐＨ５．９７一ｐＨ６．９５一ｐＨ８．９８一ｐＨ１１．００ 图５溶液ｐＨ值对ＧＳＨ氧化速度的影响 Ｆｉｇ．５ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐＨ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＳＨ ２．６离子交换树脂的选择 各种树脂操作吸附容量的测定实验结果如表４ 所示，由表可以看出在ｐＨ ４．０时，不同树脂对ＧＳＨ 的饱和操作吸附容量差异很大，但饱和操作吸附容 量均大于每克干树脂１５ ｍｇＧＳＨ。当进一步做解吸 研究时，各种树脂的解吸得率如表４所示，离子交换 树脂的解吸得率要比大孔吸附树脂的解吸得率高， 这可能是在ｐＨ４。０时谷胱甘肽带正电，呈阳离子状 表４各种树脂的饱和操作吸附容量及解吸得率 Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｏｔａｌ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ａｎｄ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｄｅｓｏｒｐｆｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｎｓ 抽提条件：鲜酵母的质量与去离子水体积的比例为 １：１２；抽提温度９Ｏ℃；搅拌转速：３５０ ｒ／ｍｉｎ；当抽提 液温度达到９Ｏ℃就停止抽提，同时在抽提时加以氮 气保护防止ＧＳＨ的部分氧化，热水抽提放大实验 ＧＳＨ的平均收率为９０．７％。抽提液经过离心除去 菌泥，再经截流相对分子质量为１Ｏ 的超滤膜过滤， 除去大量杂蛋白，便于后续ＧＳＨ的精制分离。通过 对分离介质的饱和操作吸附容量及解吸得率研究， 确定选用强酸性阳离子交换树脂Ｄ０６１作为介质来 分离谷胱甘肽。 参考文献： ［１］Ｍｅｉｓｔｅｒ Ａ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｍ Ｅ １９８３．５２：７１１－７６０． ［２］ Ｏｒｒｅｎｉｕｓ Ｓ，Ｍｏｌｄｅｎｓ Ｐ．Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｉｎ ｄｒｕｇ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＴＩＰＳ，１９８４（５）：４３２－４３５． ［３］袁尔东，郑建仙．功能性食品基料一谷胱甘肽的研究进展 ［Ｊ］．食品与发酵工业，１９９９，２５（５）：５２－５７． ［４］ 沈亚领，李爽，迟莉丽，等．谷胱甘肽的应用与生产［Ｊ］．工业 微生物，２０００，３０（２）：４１．４５． ［５］ 潘飞，邱雁临，黄欣．啤酒废酵母中谷胱甘肽的抽提新方法 的探讨［Ｊ］．生物技术，２００５，１５（４）：５０－５２． ［６］ 刘娟，刘春秀，王雅琴，等．发酵生产谷胱甘肽的研究进展 ［Ｊ］．微生物学通报，２００２，２９（６）：７２－７５． ［７］ 陶锐，吴梧桐，许激扬．酶法制备谷胱甘肽工艺的研究［Ｊｊ． 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