2011-12-30国家自然科学基金课题申报成功的关键与策略申报成功的关键与策略黎健卫生部北京老年医学研究所2011.12.29选题符合科学基金的资助范围和学科性质（仔细阅读指南）。在临床专业领域申请自然科学基金必须紧紧抓住疾病。临床问题、科学问题、工作假说是申请立项的基础，创新是核心，突出重点和研究基础是成功的关键。¾上：原有研究的深入和拓展（扬长避短）；¾中（没有基础）：大量阅读文献，仔细分析推敲，找出薄弱点。新颖是关键。常见的问题：重复研究：¾不完全了解前人的工作；¾不阅读《项目指南》,不查阅《资助项目汇编》研究内容甚至项目名称都与前一两年资助项目雷同，无创新性。打一枪换一个地方。主题词想让什么样的专家评您的“申请书”？例1：肺动脉高压；人肺动脉平滑肌细胞；核糖体蛋白L22人肺动脉平滑肌细胞；核糖体蛋白L22 ；分子机制；基因芯片例2：心肌梗塞；心功能不全；热休克蛋白；血管生成心肌梗塞；热休克蛋白；血管内皮细胞；转基因；信号传导申请书一审谁看标书：同行（少），大同行小外行（多），外行（少）。标书看多长时间：几分钟，十几分钟是常态，花费大量时间看标书的评审专家很少。看什么：¾有没有重要的问题，是什么问题；¾工作假说是什么；¾是否有明显的创新；¾是否有可能做（可行性、能力）。题目题目是评审专家首先接触到的内容，是申请者给评审专家建立第一印象的窗口。题目的撰写要符合以下几个条件：临床问题和科学问题。工作假说。因果关系模型。创新点。COX-2甲基化与表达及与胃癌癌前病变的关系临床问题——癌前病变。科学问题——癌前病变发生的原因。工作假说——COX-2甲基化及其表达可能与癌前病变有关。因果关系——因－甲基化，果－癌前病变。22种新CYP209等位基因与黄酰脲降糖药物代谢的相关性研究摘要假设评审专家没有足够的时间看后面的内容，也能把握整个标书的主要内容。摘要中的重点仍是针对评审专家关心的问题。如临床问题/科学问题是什么，工作假说是什么，研究方案和关键技术，预期目标与意义等。400字以内：研究背景（2～3句）,问题提出（1～2句）,前期实验提示（1～2句）,提出假说（1～2句）,研究内容（要体现研究思路、研究层次与水平）究层次与水平）,科学意义（1～2句,要明确、具体）。科学意义（12句要明确具体）常用连接词：针对……现状，提出……假说，用……方法（手段）进行……研究，探索/证明……问题，对阐明……机制／揭示……规律有重要意义，为……奠定基础／提供……思路。12011-12-30摘要例脂肪因子apelin脂肪因子apelin除了在脂肪组织合成和分泌外，还作为孤儿除了在脂肪组织合成和分泌外，还作为孤儿GG蛋白偶联APJ蛋白偶联APJ受体受体的配体广泛分布在各种组织中。迄今对apelin的配体广泛分布在各种组织中。迄今对apelin的功能及其与糖尿病的关系的功能及其与糖尿病的关系仍知仍知之甚少。之甚少。我们的预实验结果提示我们的预实验结果提示apelinapelin在肝胰岛素抵抗发生中起重要作用。在肝胰岛素抵抗发生中起重要作用。但但其作用机制还有待进一步探讨。为此，其作用机制还有待进一步探讨。为此，我们提出假说我们提出假说：：apelin/APJapelin/APJ可能通过诱可能通过诱导氧化应激影响胰岛素信号通路导氧化应激影响胰岛素信号通路，导致肝胰岛素抵抗的发生。为了验证这一假导氧化应激影响胰岛素信号通路，导致肝胰岛素抵抗的发生。导致肝胰岛素抵抗的发生为了验证这一假为了验证这假说，我们将通过人肝癌细胞系，我们将通过人肝癌细胞系HepG2HepG2、大鼠肝原代细胞和大鼠胰岛素抵抗模型，、大鼠肝原代细胞和大鼠胰岛素抵抗模型，采用real time PCR采用real time PCR、、Western blotWestern blot、腺病毒载体转染、、腺病毒载体转染、RNARNA干扰等手段，从分干扰等手段，从分子、细胞、组织以及动物整体水平等多方面探讨apelin子、细胞、组织以及动物整体水平等多方面探讨apelin在肝胰岛素抵抗发生中在肝胰岛素抵抗发生中的重要作用，明确apelin的重要作用，明确apelin通过诱导氧化应激对肝糖异生和糖原合成的调控机制。通过诱导氧化应激对肝糖异生和糖原合成的调控机制。本研究将从本研究将从apelinapelin这个新视点为揭示这个新视点为揭示胰岛素抵抗的发生机制胰岛素抵抗的发生机制奠定基础奠定基础，为，为22型糖尿病及其并发症的防治提供新的思路糖尿病及其并发症的防治提供新的思路。。立项依据注意事项格式清晰、逻辑合理。能让评议专家对你要阐明的项目研究意义、国内外研究现状和研究目标一目了然。对研究意义的叙述要简明扼要，叙述恰当。对国内外研究现状的分析要全面、透彻；对提出的研究目标要合理、适当，避免太分散。对理论依据的推测和假设必须严谨、科学，特别是对创新性内容的提出和分析，必须考虑到其理由的充分和合理。语言要科学、准确，切忌含糊。可设立小标题，分段渐进，环环相扣，可读性要强。注意是否有当年发表的相关进展的文章。文字要充分校对，包括参考文献的格式。研究内容研究内容：为完成本课题（论证假说）从不同方向（角度、层次）研究（紧扣目标,层次分明,突出重点、逻辑性强）。例背景：炎症细胞产生的新因子(A)具有促心肌细胞肥大的作用。11.心肌肥厚发病过程中A因子的动态变化与疾病表现关系；心肌肥厚发病过程中A因子的动态变化与疾病表现关系2.补充外源性A因子或过表达A因子对心肌细胞肥大的影响；3.阻断内源性A因子对心肌细胞肥大的影响；4.A因子发挥效应是否通过已知的心肌肥大因素；5.A因子效应的分子机制；6.动物实验验证A因子在心肌肥厚发病过程中的作用及分子机制。立项依据说明要做什么？为什么要做？研究现状评述(国际研究现状、国内研究现状)。分析别人工作中存在的问题，从而凝练并提出问题，阐述重要性，解决及意义。抓住关键点，说明自己的前期工作(在前期工作中发现了什么)。由已有的研究引出假设。研究思路叙述。可能意义的分析可能意义的分析。小结... (重点用黑体字)。参考文献（20～30条左右）：权威、新（近3年内，最好是当年的）、有自引。常见的问题：未能掌握国际同类及相关领域的研究动态，引用的参考文献过于陈旧。缺乏对科学问题的凝练或缺少合理的科学假说，停留在观察性的描述层面。缺乏自己前期工作的提示。研究目标总体要求：范围合适;重点突出;关键问题选择准确注意：小题大做、深做;不要大题小做、浅做。研究目标即通过研究要达到的具体目的，是项目申请的精髓。这段内容主要是阐述通过本课题研究将达到什么目标，其理论意义，学术价值，直接或潜在的应价值以及可能产生的社会和经济效益。例本项目通过人肝癌细胞系HepG2以及大鼠肝原代细胞和大鼠胰岛素抵抗模型，从分子、细胞和组织水平以及体内实验等多方面探讨Apelin在肝胰岛素抵抗发生中的重要作用，明确Apelin通过诱导氧化应激对肝糖异生和糖原合成的调控机制，从Apelin这个新视点为揭示胰岛素抵抗的发生机制奠定基础，为2型糖尿病及其并发症的防治提供新的思路。拟解决的关键问题完成本研究在理论上和技术上的“瓶颈”,应简述对策。例1Apelin在肝胰岛素抵抗发生中起何种作用? 是诱导还是抑制胰岛素抵抗？这是本项目拟解决的关键科学问题之一。本项目将采用RNA干扰手段沉默APJ受体，通过肝癌细胞系HepG2以及大鼠肝原代细胞和大鼠胰岛素抵抗模型的研究明确Apelin在肝胰岛素抵抗发生中的作用。Apelin是否通过诱导氧化应激调控肝糖异生和糖原合成? 这是拟解决的关键科学问题之二。本项目将采用各种抑制剂、激动剂以及RNA干扰沉默NOX3，探讨Apelin如何诱导氧化应激的产生，验证Apelin调控肝糖异生和糖原合成的机制。在大鼠模型中如何有效抑制肝脏中NOX3和APJ的表达? 这是拟解决的关键技术问题。本项目将静脉注射携带NOX3-siRNA或APJ-siRNA的腺病毒载体，我们在以往的研究中已用此法成功地抑制肝脏中基因的表达。22011-12-30研究方案研究方案要合理,环环相扣,设计好对照组,列出具体的方法和技术（先进、可靠、有创新）,技术路线可用流程图（即实验程序,不要太繁）研究方法、技术路线、实验方案其实就是把一个问题讲具体了。简述具体的实验方法，使评审者相信申请人确实掌握了该方法。尽可能使用经典的、公认的研究方法。如果使用的不是经典或公认的方法，解释该方法比经典方法的好处经典方法的好处、可信度等。可信度等常见的问题：只是检测患者一种基因的突变，而没有深入研究这种基因突变后的功能改变与疾病的关系。没有考虑到疾病的不同阶段和不同病因。动物实验分组不科学。例如缺乏对照组。动物实验只是简单重复人体研究，没有体现出应用动物模型解决人体研究不能解决的问题。可行性分析例1研究基础扎实：前期我们在淋巴增殖性疾病的发病机制、生物学特性及预后相关因素方面做了大量工作，为实施本课题奠定了良好的基础，包括……。研究目标切实：本课题研究目标的选择建立在我们前期研究成果和对国内外大量文献分析和推理的基础上，具有充分的立论依据，确保了研究目标切实可行。临床标本充足：……。技术平台与硬件设施完善：已具备了良好的分子生物学和细胞生物学技术平台,例如：……; 也具有先进完善的仪器设备,主要有……。团队结构合理：课题申请者……; 课题组成员结构合理,涵盖了本课题所需的各学科的人才。该团队长期从事……的研究，具有较深厚的研究背景；同时熟练掌握各种实验技术的操作方法。国际合作与交流：与英国……和德国……建立并保持长期学术交流和合作关系,共同开展……。项目的特色与创新所谓特色与创新即在本项目研究领域中申请者与国内外同行所不同的，应从对包括项目的立论依据、研究内容、研究方法与手段、技术路线及实验方案上的研究与创新点进行概括、提炼并集中反映出来:¾学术思想（理论）的创新；¾技术方法的创新；¾研究新模式研究新模式。常见的问题：跟踪、移植国际研究热点和高新技术手段,缺乏创新性(例如，例如，基因多态性筛选)。项目选题不能紧密结合临床实践，缺乏在临床实践中发现问题，进行选题、立题，而是围绕高新技术，为了申请项目而研究，缺乏临床和基础的有机结合（例如，例如，MicroRNA）。只是分析一些普通指标，缺乏对机制的探讨。可行性分析该申请在理论上是否可行。实验设计是否合理。重点放在研究方法和研究方案的可行性上：¾已掌握的研究方法；¾材料来源；¾实验条件；¾前期工作基础；¾项目组人员结构。项目人员结构可行性分析除了对本单位的研究实力进行恰当的分析外，最好找一家比自己单位强的合作伙伴，把他们的软硬件条件也加进去，现在的项目越来越看重多单位合作。常见的问题：题目过大，实验内容过多。如某些课题中有多个实验分组，每组均进行基因组学、蛋白组学及代谢组学分析。缺乏前期工作基础。动物实验难以建立。临床标本来源不足。可行性分析例2充分的立论依据坚实的研究基础合理的实验设计可靠的预实验结果成熟的技术条件结构合理的创新团队项目的特色与创新例新基因KL92是本申请人前期工作中识别的一个功能基因，目前为止，尚未见国内外有解析KL92基因功能的研究报道。因此，本项目属于源头创新，所研究的对象和所挖掘的任何信息都将具有突破性的价值。研究KL92在肝糖异生过程中的功能和机制目前未见任何报道研究KL92在肝糖异生过程中的功能和机制目前未见任何报道，有望揭示新的有望揭示新的作用机制。本项目的实验设计中具有系统性的创新特色，从细胞系、原代细胞、组织和动物整体水平等多方面进行实验设计，拟挖掘KL92和肝糖异生的关系，并以PGC1/FOXO1为靶点，探索其可能机制。本研究中，除KL92/PGC1/FOXO1的作用探索外，着重研究在T2DM疾病状态下，特别是肝脏胰岛素抵抗状态下，分子间的作用机理，这一层面上相对的工作在国内外都相对匮乏。32011-12-30年度计划与预期结果年度计划与预期结果内容分划于各年度,层次分明,不要用专门时间去“文献调研、结题、整理、撰文”。预期结果：明确,可以达到,留有余地,与预期目标呼应：¾该研究可能得出的结论；¾该研究可能提出的进一步研究的线索；¾发表的研究论文；¾申请的技术专利；¾可应用产品的开发；¾人才培养。例明确Apelin在肝胰岛素抵抗发生中的作用。确定Apelin诱导氧化应激产生的机制。初步阐明Apelin调控肝糖异生和糖原合成的机制。在国外主流杂志上发表IF≥5论著1-2篇，国内核心期刊上发表论文3-4篇。培养研究生3名，其中博士研究生2名，硕士研究生1名。实验条件本单位实验条件(包括已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径)。技术条件：¾实验模型的建立；¾预实验的结果；¾关键材料。利用重点实验室（包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划与落实情况，证明）。国际合作（证明）。预祝大家在预祝大家在20122012年的申报中年的申报中取得圆满成功！研究基础要介绍与申请项目直接相关的研究结果。提供原始数据，解释前期工作结果需要进一步扩展和深入。以往应用与申请项目有关的技术方法的经历。申请人及主要参加者所做的与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩要尽可能详尽地在申请书中反映。提供有关的研究论文、成果及专利等材料。提关究原始数据最好是申请者本人发表的论文；或申请者尚未发表的数据；或申请者所在实验室的工作。常见的问题：相关的前期研究工作基础不够，没有提供充分的实验依据。没有重要的相关研究成果。没有预试验结果。申请者缺乏课题相关的动物实验和分子生物学的背景。申请人与项目组成员申请人项目组成员学历、科研工作简历：¾申请、主持、参加过的研究课题；¾曾获得的研究奖项。发表论文：先概括叙述（总数,SCI,引用),再列代表著作目录（注意论文排序）。申请队伍：¾反映团队水平,注意学科搭配,不要用名人效应,不要超项反映团队水平,注意学科搭配,不要用名人效应,不要超项。¾高级研究人员（1-2人）,中级研究人员（2-3人）,技术人员及研究生（3-4人）。常见的问题：缺乏课题相关的专业研究人员。项目组成员中具体做课题的人太少。分工不明确，没有具体落实工作内容。临床医生申请的课题中没有研究生的参与。4