２００９年１月内蒙古大学学报（ｔｌ然科学版）Ｊａｎ．２００９第４０卷第１期ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＶ０１．４０ＮＯ．１文章编号：１０００—１６３８（２００９）０１—００７５－０４正交试验法优选田七花总黄酮的提取工艺’王玲霞１，牛雪平１，马建永２，萨楚拉图１（１．内蒙古大学化学化工学院，呼和浩特０１００２１；２．河北建筑工程学院，张家口０７５０２４）摘要：用正交试验法对田七花中的总黄酮提取工艺进行优化．以田七花中的总黄酮含量为考察指标，采用正交试验Ｌ，（３‘）表进行实验，对提取过程中的乙醇浓度、提取时间、提取次数及料液比四个影响因素进行研究．结果显示影响田七花中的总黄酮提取工艺的显著因素是提取次数，最佳提取工艺是：１２倍量的８０％的乙醇提取３次，每次１ｈ．关键词：田七花；总黄酮；提取工艺；正交试验中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ引言田七［Ｐａｎａｐｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ）Ｆ．ＨＣｈｅｎ］，又名山漆、血参、金不换、参三七、田三七、滇三七、盘龙七等，为五加科草本植物，主产于广西、云南，多系栽培．田七的根、花、叶、果均可入药，其主要化学成分是皂苷类和黄酮类化合物，此外，还有生物碱、蛋白质、挥发油、脂肪油、树脂、胡萝卜素、糖类等㈨．目前，对田七的化学成分研究主要集中于皂苷的含量测定和结构的鉴定乜￣２¨，迄今为止，已从三七的不同部位分离得到６０余种单体皂苷成分。∞，而对其黄酮类化合物报道较少，对田七花中的总黄酮含量和结构鉴定还未见报道．本文以花中的总黄酮含量为考察指标，采用正交试验Ｉ。。（３４）表进行实验，对提取过程中的乙醇浓度、提取时间、提取次数及料液比四个影响因素进行研究，以期优选出田七花中黄酮的最优提取工艺，为进一步开发利用田七提供理论依据．１实验材料１．１原料与试剂田七花购自河北省隆祥药材有限公司；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；其他试剂均为分析纯．１．２仪器ＵＶ一１２０—０２型紫外一可见分光光度计（日本岛津）；ＳＨＺ—Ｃ型水循环式多用真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；ＡＩ。Ｃ一２１０．４电子天平（北京塞多利斯仪器系统有限公司），ＲＥ５２一ＡＡ旋转蒸发仪（上海本波仪器有限公司）．２方法２．１黄酮含量测定方法（１）样品液的制备：称取经过干燥的田七花５．０ｇ，置于圆底烧瓶中，按表１中选定的因素和水平用乙醇回流提取，合并滤液，用石油醚萃取至无色后转移至２５０．０ｍＬ的容量瓶中，用乙醇定容，备用．・收稿日期：２００８—０９—２５作者简介：王玲霞（１９８２～）。女，河北保定人．２００６级硕士研究生，研究方向：中草药的提取、分离和结构鉴定．万方数据内蒙古大学学报（自然科学版）（２）标准溶液的配制：精密称取芦丁标准品１５．０ｍｇ于１５０．０ｍＬ容量瓶中，用６０％的乙醇定容，摇匀，备用（每ｍＩ。溶液中含芦丁０．１ｒａｇ）．ｍＩ，，１．０ｍＬ，２．０ｍＬ，３．０ｍＬ，４．０ｍＬ，置６ｍＩ。，５．０ｍＩ。于１０．（３）标准曲线的绘制：精密吸取芦丁标准溶液０．０ｍｉｎ，加１０％的Ａｌ（Ｎ０。）。溶液０．３ｍＩ。，摇匀，放置６ｍｉｎ，再加４％ＮａＯＨ溶液４．００ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水至５．０ｍＩ。，加５％的ＮａＮＯ：溶液０．３ｍＩ。，摇匀，放用蒸馏水定容，摇匀，放置ｎｍ处测定吸光度，以吸光度对浓度Ｃ（ｇｇ／ｍＩ。）做图（图１），并求得回归方程为：Ｙ＝０．１５ｒａｉｎ，在５１００１０２３Ｘ一０．０１０１４；Ｒ＝０．９９９３５，线性关系良好．表１Ｔａｂｌｅ１正交设计因素水平表０・Ｏ・０．Ｄｅｓｉｇｎｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ萋ｏ．督Ｏ・０・Ｏ．ＯｌＯ２０３０４０５０６０浓度Ｃ图１芦丁标准曲线Ｆｉｇ．１Ｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｏｆｒｕｔｉｎ２．２田七花中总黄酮含量的测定精密吸取样品液１．０ｍＩ。于１０．０ｍＩ。容量瓶中，按（３）中标准曲线法操作，测得吸光度值后代人回归方程，从而得到田七花中总黄酮的含量，结果见表２．表２正交试验结果Ｔａｂｌｅ２Ｒｅｓｕｌｔｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ由表２和表３可知，在乙醇提取田七花中总黄酮的影响因素中，提取次数和提取时间的影响最显著，乙醇用量次之，乙醇浓度影响最小，结合表２中Ｉ７ｃ、Ⅱ’ｅ、Ｉ’“Ⅲ７Ｄ在每一列中为最大值，因此得出乙醇提取田七花中总黄酮的最优理论工艺是Ａ。Ｂ。Ｃ。Ｄ。，即１２倍量的８０％的乙醇提取３次，每次１个万方数据第１期王玲霞等正交试验法优选田七花总黄酮的提取工艺７７小时．表３方差分析Ｔａｂｌｅ３Ｖａｒｉａｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｌｅｓｔ＊ＳＳ＝（Ｉ２＋Ⅱ。＋Ⅲ２）／３一（Ｉ＋Ⅱ＋珥）２／９，ＭＳ＝ＳＳ／Ｕ，Ｆ＝ＭＳ／ＭＳＥ（ＭＳＥ为误差的均方值）＊根据Ｆ检验的上侧临界值表查得临界值数据：Ｆ。ｌ（２Ⅲ，＝２．６２．Ｆ。。。Ｊ８）＝３．５５．Ｆ。。。。：．Ｊ８）＝６．０１２．３工艺的验证试验为了考察上述工艺的稳定性，按该工艺条件Ａ。Ｂ：Ｃ。Ｄ。进行重复性试验３次，分别测定总黄酮含量，再计算其ＲＳＤ．表４工艺验证试验结果Ｔａｂｌｅ４Ｒｅｓｕｌｔｏｆｅｘｔｒａｃｔｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ（厅＝３）由表４可知，平均含量为２．１３５％，优于正交试验中的任何一组，ＲＳＤ为０．６０４３％，说明该工艺稳定．３讨论３．１本实验采用正交试验法优选提取工艺，该方法可以减少试验次数、减少时间和费用，方便、准确，值得推广．３．２由表３可知，乙醇用量、提取时间和提取次数对提取工艺均有显著性影响，最终确定田七花中的总黄酮最佳提取工艺为：Ａ。Ｂ：Ｃ。Ｄ。，即１２倍量的８０％的乙醇提取３次，每次１个小时，提取的总黄酮含量可达２．１４６％．３．３本文对Ａ。Ｂ：Ｃ。Ｄ。工艺进行了３次平行实验，以总黄酮含量为考察指标，结果表明Ａ。Ｂ。ｃ。Ｄ。工艺稳定、重现性好，值得推广．参考文献：［Ｉ］黄儒强．郭子杰，邓伟玲．等．田七中总黄酮含量的测定及其黄酮种类的初步鉴别Ｉｊ］．现代食品科技．２００７．２３（３）：６６～６８．［２］张力彬，韦建荣，邬梅仙．田七花精中人参皂苷Ｒｂ。、人参皂苷Ｒｂ。及三七皂苷Ｆｃ的含量测定［Ｊ］．药物分析杂志，２０００。２１（５）：３１０～３１２．［３］姜彬慧．王承志，韩颖。等．三七叶中微量活性皂苜的分离与鉴定［Ｊ］．中药材．２００４．２７（７）：４８９～４９１．［４］姜彬慧．赵余庆．韩凌，三七叶皂苷酶水解产物的提取分离及结构鉴定［Ｊ］．中国天然药物．２００４．４（２）：２０２２０４．［５］陈业高．詹尔益，陈红芬，等．三七叶中低糖链皂苷的分离与鉴定［Ｊ］．中药材．２００２．２５（３）：１７６～１７８．［６］高明菊，马妮，王朝梁，等．鲜三七、干三七、活性三七皂苷含量比较［Ｊ］．人参研究．２００３．１５（２）：２５～２６．［７］魏均娴，王良安．杜华．三七绒根中皂甙和的分离和鉴定［Ｊ］．药学学报，１９８５，２０（４）：２８８～２９３．［８］魏均娴，曹树明．三七果梗皂苷成分的研究口］．中圆中药杂志．１９９２．１７（２）：９６～９８．［９］魏均娴．业高，曹树明．三七果梗皂甙成分的研究（续）［Ｊ］．中国中药杂志．Ｉ９９２．１７（９）：６１１～６１３．万方数据７８内蒙古大学学报（自然科学版）２００９焦［１０］杨崇仁，王国燕．伍明珠．等．三七芦头的皂甙成分［Ｊ］．药学通报，１９８５，２０（６）：３３７～３３８．Ｉ－１１］董阿玲．郑俊华，果德安，等．从三七中分离微量成分三七皂苷Ｒ：的方法口］．中国中药杂志，２００２．２７（１０）：７９３～７９４．［１２］欧来良，史作清，施荣富。等．强性大孔吸附树脂对三七皂苷的分离纯化研究［Ｊ］．中草药，２００３，３４（１０）：９０５～９０７．［１３］章观德．吸附树脂法测定三七及其制剂冠心宁总皂甙［Ｊ］．中草药，１９８１，１２（１１）：２３～２５．［１４］梁小燕，陈海珊．陈秀珍．等．三七叶甙含量测定方法比较［Ｊ］．广西植物，１９９６，１６（７）：２８７～２９１．［１５］周志华．章观德，王菊芳．三七中皂甙成分分析的研究［Ｊ］．药学学报．１９８ｌ，１６（７）：５３５～５４０．［１６］张萱．朱天琪．薄层扫描法测定三七药材中人参皂苷的含量［Ｊ］．中国中药杂志，２００１，２６（５）：３４２．［１７］周迎春，赵怀清，梁宁，等．高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Ｒｇ、Ｒｅ、Ｒｂ。和三七皂苷Ｒ１含量［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００３，２０（１）：２７～３１．［１８］江林，顾琼珠，何婷能．等．树脂吸附分离一比色法测定三七中总皂苷含量［Ｊ］．云南中医学院学报，１９９５，１８（２）：１１～１２．［１９］魏风玲，朱春波，朱立平，等．三七总皂苷提取工艺优选口］．中国中药杂志，２０００，２５（１２）：７２２～７２３．［２０］孔燕君，洪美凤．紫外分光光度法测定人参及三七中总皂苷含量［Ｊ］．中国现代应用药学，２０００．１７（１）：５１～５２．［－２１］王兴文．水提三七总甙［Ｊ］．云南中医学院学报，２００１，２４（３）：１～３．［２２］鲍建才，，丛登立，等．三七的化学成分研究进展［Ｊ］．中成药，２００６，２８（２）：２４６～２５３．（责任编委边占喜）ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓｏｆＴｏｔａｌＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆＦｌｏｗｅｒｓｏｆＰａｎａｐｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｗｉｔｈＯｒｔｈｏｇｏｎａｌＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔＷＡＮＧＩ．ｉｎｇ—ｘｉａｌ，ＮＩＵＸｕｅ—ｐｉｎ９１，ＭＡＪｉａｎ—ｙｏｎ９２，ＳＡＣｈｕｌａｔｕｌ（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨｏｈｈｏｔＡｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ０１００２１，Ｃｈｉｎａ；２．ＨｅＢｅｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｒｄｅｒｏｆＣｉｖｉｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｈａｎｇｊｉｉａｋｏｕ０７５０２４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｎｔＯｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓＯｆｔｈｅｔｏｔａｌｆｌｏｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｔｈｅｆｌｏｗｅｒｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓＰａｎａｐｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ，ｆｈｅｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｔｏｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｏｆｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｆａｃｔｏｒｓ：ｍａｔｅｒｉａｌ。ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．ＴｈｅｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｃｈｅｃｋｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｆｏｕｒｔｏｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＯｆａｌｃｏｈｏｌ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｎｇａｍｏｕｎｔｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｈａｖｅａａｓａｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｖｅｎｔｍａｒｋｅｒａｃｃｏｒｄｉｎｇｏｎｔｏＩ，９（３４）ｓｃｈｅｍｅ．ＴｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐａｃｔｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎＯｆｔｏｔａｌ［１０ｖｏｎｏｉｄｓｆｔｏｍｔｈｅｆｌｏｗｅｒｓｒｕｎｏｆＰａｎａｐｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｗａｓＡ３８２Ｃ１Ｄ３：ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗａｓｔｉｍｅｓｅａｃｈｈｏｕｒ，ａｎｄｔｈｅａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆ８０％ａｌｃｏｈ０１ｗａｓｕｓｅｄＫｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｌｏｗｅｒｏｆＰａｎａｐｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ；ｔｏｔａｌａｓｔｈｒｅｅａｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｏｌｖｅｎｔ．ｐｒｏｃｅｓｓ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ万方数据
