猪PPARs基因组织表达特性的研究

２００６年第４２卷第１９期　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ．目圃　猪ＰＰＡＲｓ基因组织表达特性的研究　孔路军　，王爱国ｔ　，傅金恋１．２，张毅良，，王晓风　（１　中国农业大学动物科技学院，北京１０００９４；２．农业部动物遗传育种重点开放实验室，北京１０００２９）　１０００９４；　３．北京市农业局畜牧兽医管理处，北京摘要：以成年母猪为研究材料，采用ＲＴ—ＰｃＲ半定量法对猪ＰＰＡＲ￣、　／６和　基因组织表达特点进行了研究。结　果表明：在检测的１８种组织中除胰腺组织外，３种ＰＰＡＲ亚型在其他１７种组织中均有表达。表达量高低依次为　ＰＰＡＲ￣，子宫绒毛膜＞皮下脂肪＞卵巢＞大肠＞脾脏＞大脑＞肾上腺＞心脏＞肺＞小肠＞脊髓＞子宫蜕膜＞胃＞肝脏＞背最　长肌＞膀胱＞肾脏；ＰＰＡＲＢ，子宫绒毛膜＞卵巢＞大肠＞脾脏＞肝脏＞胃＞皮下脂肪＞大脑＞肺＞。肾上腺＞子宫蜕膜＞脊髓＞　背最长肌＞心脏＞。肾脏＞小肠＞膀胱；ＰＭＲ　，背最长肌＞皮下脂肪＞卵巢＞脾脏＞肺＞大肠＞膀胱＞子宫绒毛膜＞子宫蜕　膜＞心脏＞胃＞肝脏＞肾脏＞大脑＞脊髓＞。肾上腺＞小肠。３种亚型Ｐ　Ｒ在卵巢和／或子宫绒毛膜中都有较高的表达，　提示它们与猪的繁殖性能相关。　关键词：畜牧、畜医科学基础学科；过氧化物酶体增殖物激活受体；组织；ＲＴ—ＰＣＲ；猪　中图分类号：￥８２８．２　文献标识码：Ａ　文章编号：０２５８—７０３３（２００６）１９—０００１—０４　自Ｉｓｓｅｍａｎｎ等…首先发现过氧化物酶体增殖物　激活受体（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，　ＰＰＡＲ）以来，ＰＰＡＲｓ在机体内所表现出的重要生物　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）提取总ＲＮＡ，并用无ＲＮａｓｅ的ＤＮａｓｅ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）处理所有总ＲＮＡ样品以去除样品中的　ＤＮＡ。用１．Ｏ％变性琼脂糖凝胶电泳检测ＲＮＡ的完整　性和纯度，并检测ＯＤ值来确定ＲＮＡ浓度。最后调整　学功能（如与脂类代谢、免疫反应、动脉硬化、肥胖、糖　尿病、肿瘤以及炎症反应等有关）已引起了广泛的关　注。根据结构及功能特点，ＰＰＡＲｓ可分为ＰＰＡＲｏｔ、　（或　卢）及　３种亚型，由各自的基因编码［２１。与该３种亚型　各组织样总ＲＮＡ浓度至２　ｘＩｇ／ＸＩＬ后分装保存于一７０￣Ｃ　备用。　１．２引物设计与合成采用Ｏｌｉｇｏ　６．０软件，分别以猪　的生物学功能一致，它们的表达具有组织特异性。目前　已在非洲爪蟾、大鼠、小鼠、兔、人、牛、鸡以及羊的多种　组织中检测到了ＰＰＡＲｓ的存在，且在大多数组织细胞　中ＰＰＡＲｏｔ、８和　是共表达的，但表达水平相差悬殊。　然而有关该３种亚型在猪的不同组织中的表达情况研　究较少，目前尚不十分清楚。故本研究旨在弄清ＰＰＡＲｓ　的组织表达特点和规律，从而为进一步研究猪ＰＰＡＲｓ　的生理功能提供基础资料。　１材料与方法　ＧＡＰＤＨ基因ｍＲＮＡ序列和克隆获得的猪ＰＰＡＲｏｔ、８和　基因ｍＲＮＡ序列为模板设计引物，并由北京奥科生　物公司合成，见表１。　１．３　ＲＴ—ＰＣＲ扩增　１．３．１　ｃＤＮＡ的合成在Ｏ．２　ｍＬ薄壁ＰＣＲ管中加　入提取的总ＲＮＡ（２ｐｇ／ｘｉＬ）１　ＩＸＬ，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１８引物　（２５　ｐｍｏｌ／ｕＬ）１ＩＸＬ，１０　ｍｍｏ］／Ｌ　ｄＮＴＰｓ　ｍｉｘ　２　ＩＸＬ，双蒸　水２Ｏ　Ｌ，混匀后稍离心，７０℃反应５　ｍｉｎ后立即放冰　上速冷１　ｍｉｎ。再依序加入５　Ｘ　ＰＣＲ　ｂｕｆｆｅｒ　８　ＩＸＬ，ＲＮａ　ｓｅｌＮ２ＩＸＬ，０．１　ｍｏｌ／ＬＤＴＹ２ＩＸＬ和双蒸水２ＩＸＬ，混匀后稍离　１．１总ＲＮＡ的提取与处理屠宰３头平均日龄为　心．４２℃反应５　ｍｉｎ后再加入Ｍ—ＭＬＶ反转录酶２　ｕＬ（Ｉｎ—　ｖｉｔｒｏｇｅｎ），于４２℃反应６０ｍｉｎ，最后于７Ｏ℃反应１５ｍｉｎ终　３４３　ｄ的长荣（长白猪Ｘ荣昌猪）初产母猪，迅速取大　脑、脊髓、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺、胃、胰脏、大肠、小　止反应。合成的ｃＤＮＡ保存于一２Ｏ℃备用。　１．３．２　ＰＣＲ反应以反转录合成的ｃＤＮＡ为模板，分　别ＰＣＲ扩增ＰＰＡＲｏｔ、８、　和ＧＡＰＤＨ目的片段。采用　２５　Ｌ反应体系，即双蒸水１７．３ＩＸＬ，１０ＸＢｕｆｆｅｒ２．５　Ｌ，１０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰｓ　２．０　ＩＸＬ，上下游引物（１０　ｐｍｏｌ／ｕＬ）各０．６　ＸＩＬ，ｃＤＮＡ模板１．５　ＸＩＬ，Ｔａｑ聚合酶（５　Ｕ／ＸＩＬ）０５　ＸＩＬ。ＰＣＲ　反应条件：９７℃预变性５　ｍｉｎ后进行３Ｏ次循环（９５　ｏＩ二　肠、膀胱、肾上腺、卵巢、子宫绒毛膜、子宫蜕膜、皮下脂　肪和背最长肌等１８种组织样存于液氮中。用ＴＲＩｚｏｌ　收稿日期：２００６—０４—１２；修回日期：２００６—０５—２５　基金项目：国家高技术研究发展计划项目（２００２ＡＡ２４２０３１）和　国家自然科学基金项目（３０５７１３２２）　通讯作者　中固亳牧豫急●　维普资讯 http://www.cqvip.com

圆・Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　２００６年第４２卷第１９期　表１　ＲＴ—ＰＣＲ引物及ＰＣＲ扩增产物长度　３０　Ｓ，退火温度ＰＰＡＲａ、６、　和ＧＡＰＤＨ分别为５９．０、　统计软件包进行ＡＮＯＶＡ分析，并进行同一基因不同组　５９．５、５７．５和５７．０℃３０　Ｓ，７２℃１　ｍｉｎ），７２℃延伸１Ｏ　织表达量Ｄｕｎｃａｎ氏多重的比较，结果以Ｘ＋ＳＥ表示。　ｍｉｎ，降温至４℃停止反应并于一２Ｏ℃保存。　１．４　琼脂糖凝胶电泳检测　分别取目的基因和　２结果　ＧＡＰＤＨ的ＲＴ－ＰＣＲ产物各４　在１．５％琼脂糖凝胶　２．１　总ＲＮＡ提取结果所有样品的总ＲＮＡ均显示　中于５　Ｖ／ｃｍ电压条件下电泳４５　ｍｉｎ左右。电泳结束　出两条清晰、一条较浅的条带，分别为２８Ｓ、１８Ｓ和５Ｓ　后，在凝胶成像仪（Ｂｉｏ—Ｒａｄ）上观察并拍照。应用　ｒＲＮＡ（图１），其中２８Ｓ　ｒＲＮＡ条带的亮度比１８Ｓ　ｒＲＮＡ　ＬａｂＩｍａｇｅ　ｖｅｒｓｉｏｎ　２．７．１和Ｇｌｙｋｏ　ＢａｎｄＳｃａｎ　ｖｅｒｓｉｏｎ　５．０凝　条带的强，且没有ＤＮＡ及其他明显的杂带，表明总　胶图扫描分析软件对ＰＰＡＲａ、６、　和ＧＡＰＤＨ的　ＲＮＡ纯度很高且无降解。所有样品的总ＲＮＡ（无酶　ＲＴ—ＰＣＲ结果进行比较分析，以确定目的基因在各组　ＤＥＰＣ处理水溶解）的ＯＤ姗值与ＯＤ瑚值的比值均在　织样中相对于持家基因表达量的相对值。　１．６—２．０之间。表明所提取的总ＲＮＡ可以用于ｍＲＮＡ　１．５统计分析半定量处理后的数据采用ＳＰＳＳ　１０．０　的表达谱分析。　ｌ　２　３　４　５　６　７　Ｒ　９　ｌｎ　ｌｌ　ｌ２　ｌ３　ｌ４　ｌ５　１６　ｌ７　１Ｒ　２８Ｓ　１８Ｓ　５Ｓ　注：１—１８泳道分别为１．大脑，２，膀胱，３．肺，４．肾上腺，５．胃，６．脾脏，７．心脏，８．大肠，９．肝脏，１Ｏ．小肠，１１．肾脏，１２．胰腺，１３．脊髓，１４，皮下脂肪，１５．卵巢　１６．子宫绒毛膜，１７．子宫蜕膜，１８．背最长肌。下图同　图ｌ总ＲＮＡ的提取结果　２．２　ＰＰＡＲａ在猪不同组织表达的ＲＴ—ＰＣＲ检测结　２．４　删Ｒ　在猪不同组织表达的ＲＴ—ＰＣＲ检测结　果　从图２一Ａ可以看出，除胰腺没有ＰＰＡＲａ扩增　果　Ｒ　检测结果由图２一Ｃ和表２可以看出，　条带外，其余１７种组织中都有ＰＰＡＲａ　ｍＲＮＡ的表　ＰＰＡＲｙ的表达量以背最长肌、皮下脂肪、卵巢和脾脏　达，但表达丰度存在明显的差异（表２）。其中，以子宫　组织中的较高，相对表达量值分别为１．４５、１．１９、１．１和　绒毛膜、皮下脂肪、卵巢、大肠和脾脏组织的表达量较　１．０９；而其他表达组织相对丰度较小，且胰腺组织中没　高，相对表达量值分别为２．７４、２．０９、１．７９、１．２７和１．Ｏ９；　有发现有删Ｒ　的表达，而小肠、脊髓和肾上腺组织　而其他表达组织相对表达量较小。　中的表达量相对比较低，未超过０．３。这表明，尸　Ｒ　２．３　ＰＰＡＲ６在猪不同组织表达的ＲＴ—ＰＣＲ检测结　在猪不同组织中的表达同样具有组织差异性。　果　由图２一Ｂ和表２可以看出，ＰＰＡＲ６除胰腺没有扩　增条带外，以膀胱、小肠和肾脏的表达量最少，分别为　０．２７、０．３８和０．３８；而子宫绒毛膜、皮下脂肪、卵巢、大　肠和脾脏组织的表达量较高，相对表达量值分别为　ＰＰＡＲ　１．６４、１．５１、１．５１和１．４３　ＧＡＰＤＨ　ｏ中固亳牧东急　维普资讯 http://www.cqvip.com

２００６年第４２卷第１９期　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ．圈衄３讨Ｇ　ＰＤＨ　ＰＰＡＲ　　论　３．１基因表达的半定量问题Ｎｏ￣ｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ常被用于　基因的定量表达检测，它的优点是准确可靠，但除了费　用较高之外，其操作麻烦，灵敏度相对较低，并受操作　过程的影响，所以较适合作定性的研究网。ＲＴ—ＰＣＲ法　包括定量ＰＣＲ法和半定量ＰＣＲ法。因具有较高的灵　Ｒ６　ｃＡＰＤＨ　敏度（理论上只要有一个单拷贝ｃＤＮＡ模板即可完成　扩增）且操作简单，所以也被广泛用于基因表达的定量　注：ＰＰＡＲａ　、ｙ和ＧＡＰＤＨ的ＰＣＲ产物大小分别为６４２、６０５、２６２和４５３　ｂｐ；Ｍ为１００ｂｐ　Ｍ￣ｋｅｒ　研究。定量ＰＣＲ法又由于对仪器设备（如ＭＪ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　公司和ＡＢＩ公司的实时荧光定量ＰＣＲ仪）和样本处理　图２猪ＰＰＡＲａ、６和　在不同组织中的表达结果　表２猪ＰＰＡＰ￣、６和　在不同组织中的相对表达量　注：表中数据为相对于持家基因ＧＡＰＤＨ表达量的相对值；相同基因不同组织在同行肩标不同小写字母者表示差异显著（Ｐ＜０．０５），不同大写字母者表示差　异极显著（Ｐ＜０．０１）　（需要探针或专用ＰＣＲ试剂盒）的要求高，所以在一般　实验室条件下难以操作。然而，半定量ＰＣＲ法只需要　肝脏、背最长肌、膀胱和肾脏组织。然而，在成年小鼠和　大鼠中，除了棕色脂肪以外，ＰＰＡＲａ还较高表达于肝　脏、肾脏、心脏、胃、肾上腺和骨骼肌网。孟和等同采取　ＲＴ—ＰＣＲ半定量法检测鸡的１０种组织发现，ＰＰＡＲａ较　选择一个比较标准（如持家基因ＧＡＰＤＨ，　一ａｃｔｉｎ等）　即可检测。本实验中，通过设置３个重复，并采用　ＬａｂＩｍａｇｅ　ｖｅ￣ｉｏｎ　２．７．１和Ｇｌｙｋｏ　ＢａｎｄＳｃａｎ　ｖｅｒｓｉｏｎ　５．０两　高表达于脑、肺、肾脏、心脏和小肠，中等程度表达于　胃、肝脏和脂肪，较低表达于脾脏，但胸部肌肉无表达。　而对于人类，ＰＰＡＲａ在心脏、肾脏、骨骼肌和大肠中的　种电泳凝胶图扫描分析软件进行分析，结果发现所获　得的数据重复性很高，说明以这种方式可最大程度地　消除半定量ＰＣＲ法的实验误差，得到尽可能准确的经　表达较高圈，但在肝脏中的表达较啮齿类低昀。ＰＰＡＲ在　猪的多种组织中都有表达，其中以子宫绒毛膜、卵巢、　大肠、脾脏、肝脏和胃中的表达较高，中等表达于皮下　脂肪、大脑、肺和肾上腺组织，而以子宫蜕膜、脊髓、背　过同标准比较并修正的相对值。此外，ＰＣＲ反应的循环　数均在各基因出现反应平台期前（３０个循环）结束，从　而消除了因进入ＰＣＲ反应平台期而导致的表达量的　差异。　３．２删　在猪不同组织中的表达ＰＰＡＲ、　和　最长肌、心脏、肾脏、小肠和膀胱组织中表达相对较低。　略微有别的是　在背最长肌、皮下脂肪、卵巢、脾　脏、肺和大肠中表达相对较高，中等表达于膀胱、子宫　绒毛膜、子宫蜕膜和心脏组织，而在胃、肝脏、肾脏、大　这３种亚型不仅在结构及功能上存在差异，而且在不　同组织中的表达量也有较大的差别。研究中，发现３种　ＰＰＡＲ亚型除了胰腺组织外，其余１７种检测组织中都　有表达。其中，ＰＰＡＲ较高表达于子宫绒毛膜、皮下脂　肪和卵巢，中等程度表达于大肠、脾脏、大脑、肾上腺、　心脏和肺组织，较低表达于小肠、脊髓、子宫蜕膜、胃、　脑、脊髓、肾上腺和小肠中表达较低。这与Ｇｆｉｎｄｆｌｅｋ等　ｆ７】在猪、Ｂｒａｉｓｓａｎｔ等嘲和Ｍａｎｓｅｎ等凹在鼠中的检测结果　相似，即　主要在猪的脂肪组织和脾脏中表达。　然而，孟和等［３睬用ＲＴ—ＰＣＲ半定量法在鸡的肝脏和肌　中固亳牧东患●　维普资讯 http://www.cqvip.com

・Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　２００６年第４２卷第１９期　肉中没有检测到删尺　的表达，但却高表达于脂肪，　其次是脑和肾脏，低量表达于脾脏、心脏、肺脏、胃和小　肠。不同研究报道的该３种亚型表达结果存在的差异，　除了分析方法可能不同外，还与所检测的组织和品种　ｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，１９９４，９１：７３５５－７３５９。　Ａｕｂｅｅｕｆ　Ｄ，Ｒｉｅｕｓｓｅｔ　Ｊ，　ａｓ　Ｌ，ｅｔ　ｏｌ。Ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｆｉｏｎ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍＲＮＡｓ　ｏｆ　ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆ－　ｅｒａｔｏｒ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　Ｘ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ－　ｉｎ　ｈｕｍａｎｓ：ｎｏ　有关。同时３种删尺亚型在猪的卵巢和／或子宫绒　毛膜中的较高表达，提示删尺ｓ与猪的繁殖性能有　关，但需进一步研究和验证。　参考文献：　［１】Ｉｓｓｅｍａｎｎ　Ｉ，Ｇｒｅｅｎ　Ｓ。Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｍｅｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｒｏｉｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ　ｂｙ　ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９０，　３４７：６４５—６５０．　ｌａｔｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａｄｉｐｏｓｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｏｂｅｓｅ　ａｎｄ　ＮＩＤＤＭ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ】．　Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９７，４８：１３１９—１３２７。　Ｐａｌｍｅｒ　Ｃ　Ｎ　Ａ，Ｈｓｕ　Ｍ　Ｈ，Ｇｒｉｆｉｎ　Ｋ　Ｊ，ｅｔ　ｏ１．Ｐｅｒｏｆｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｃｅｐｔｅｏｒ－　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｉｖｅｒ［Ｊ］。Ｍｏｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏ１．　１９９８，５３：１４—２２．　Ｇｆｉｎｄｆｌｅｋ　Ｅ，Ｓｕｎｄｖｏｌｄ　Ｈ，Ｋｌｕｎｇｌｎｄ　Ｈ，ｅｔａ　ｏ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ－ａｃｔｉｖａｔｄ　ｒｅｅｃｅｐｔｏｒ　ｙｌ　ａｎｄ　ｙ２：ｄｅ－　ｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｒｅｅｄ　ａｎｄ　ａｇｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ】．Ｂｉｏｃｈｅｍ　ｎｄ　Ｂｉａｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ，１９９８，２４９：７１３—７１８。　［２】Ｓｃｈｏｏｎｊａｎｓ　Ｋ，Ｓｔａｅｌｓ　Ｂ，Ａｕｗｅ￣Ｊ．Ｔｈｅ　ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ　ａｃｔｉ－　ｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（ＰＰＡＲＳ）ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｅｆｆｃｔｅｓ　ｏｎ　ｌｉｐｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ａｎｄ　ａｄｉｐｏｃｙｔｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｉｍ［ＪＪ．Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ，１９９６，１３０２：　９３—１０９．　Ｂｒａｉｓｓｎｔａ　Ｏ，Ｆｏｕ￣Ｈｅ　Ｆ，Ｓｃｏｔｔｏ　Ｃ，ｅｔ　ｏｌ。Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉａｏｎ　ｏｆ　ｐｅｍｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ—ａｃｔｉｖａｔｄ　ｒｅｅｃｅｐｔｏｒｓ（ＰＰＡＲｓ）：ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｓｔｒｉ—　ｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＰＡＲａ，卢ａｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｄｕｌｔ　ｒａｔ［ＪＪ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，　１９９６，１３７：３５４—３６６．　［３】孟和，李辉，王宇祥．鸡ＰＰＡＲｓ基因组织表达特性的研究［ＪＪ．　遗传学报，２００４，（３１）：６８２—６８７．　［４Ｊ　Ｋｌｉｅｗｅｒ　Ｓ　Ａ，Ｆｏｒｍａｎ　Ｂ　Ｍ，Ｂｌｕｍｂｅｒｇ　Ｂ，ｅｔ　ｏｌ。Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓ－　ｓｉｏｎ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｆａｍｉｌｙ　ｏｆ　ｍｕｒｉｎｅ　ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃ一　Ｍａｎｓｅｎ　Ａ，Ｇｕａｒｄｉｏｌａ－Ｄｉａｚ　Ｈ，Ｒａｆｔｅｒ　Ｊ，ｅｔ　ｏ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｅｒｏｘ—　ｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ—ａｃｔｉｖａｔｄ　ｒｅｅｃｅｐｔｏｒ　Ｒ）ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｃｏｌｏｎｉｃ　ｍｕｃｏｓａ［￣．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，１９９６，２２２：８４４—８５１．　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｉｎ　Ｐｉｇｓ　ＫＯＮＧ　Ｌｕ－ｊｕｎ　，ＷＡＮＧ　Ａｉ—ｇｕｏ　，　，ＦＵ　Ｊｉｎ－ｌｉａｎ　一，ＺＨＡＮＧ　Ｙｉ－ｌｉａｎｇ　，ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏ—ｆｅｎｇ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１　０００９４，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ｍｉｎｉｓｔｙ　ｒｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００９４，Ｃｈｉｎａ；　３．Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００９４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉ—．　ｒａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（Ｐ　尺）０［，　ｎｄ　ｙ　ｉａｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＲＴ—ＰＣＲ　ｓｈｏｗｅｄ　ａｎｄ　ｙ　ａｒｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ａｌｌ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｔｉｓｓｕｅｓＴｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　．ｈａｔｔ　ｅｘｃｅｐｔ　ｆｏｒ　ｐａｎｃｒｅａｓ，ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｏｆ　ＰＰＡ　Ｒｏｒ，　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＰＰＡ　Ｒ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｒｔ　ｉｎ　ｕｔｅｒｉｎｅ　ｃｈｏｒｉｏｎ，ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｆａｔ　ａｎｄ　ｏｖａｒｙ，ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｌａｒｇｅ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅｓｐｌｅｅｎ，　，ｂｒａｉｎ，ａｄｒｅｎａｌ　ｇｌａｎｄ，ｈｅａｒｔ　ａｎｄ　ｌｕｎｇ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ　ｉｎ　ｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ，ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄｕｔｅｒｉｎｅ　ｄｅｃｉｄｕａ，ｓｔｏｍａｃｈ，ｌｉｖｅｒ，　，ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｍｕｓｃｌｅ，ｕｒｉｎａｒｙ　ｂｌａｄｄｅｒ　ａｎｄ　ｋｉｄｎｅｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＰＰＡ　Ｒ６　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉ【ｇ｝ｌｅｓｔ　ｉｎ　ｕｔｅｒｉｎｅ　ｃｈｏｒｉｏｎ，ｏｖａｒｙ，ｌｒｇｅ　ａｉｎｔｅｓｔｉｎｅ，ｓｐｌｅｅｎ，ｌｉｖｅｒ　ａｎｄ　ｓｔｏｍａｃｈ，ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｆａｔｂｒａｉｎ，ｌｕｎｇ　ａｎｄ　ａｄｒｅｎａｌ　ｇｌａｎｄ，　，ｎｄ　ｔａｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ　ｉｎ　ｕｔｅｒｉｎｅ　ｄｅｃｉｄｕａ，ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ，ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｍｕｓｃｌｅ，ｈｅａｒｔ，ｋｉｄｎｅｙｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ａｎｄ　ｕｒｉｎａｒｙ　ｂｌａｄｄｅｒ．　，Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ删尺ｙ　ｗａｓ　ｉｎ　ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｍｕｓｃｌｅｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｆａｔｓ，ｏｖａｒｙ，ｓｐｌｅｅｎ，ｌｕｎｇ　，，ａｎｄ　ｌａｒｇｅ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ，ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｕｒｉｎａｒｙ　ｂｌａｄｄｅｒ，ｕｔｅｒｉｎｅ　ｃｈｏｒｉｏｎ，ｕｔｅｒｉｎｅ　ｄｅｃｉｄｕａ　ｎｄ　ａｈｅａｒｔａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ　ｉｎ　ｓｔｏｍａｃｈ。　ｌｉｖｅｒ，ｋｉｄｎｅｙ，ｂｒａｉｎ，ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ，ａｄｒｅｎａｌ　ｇｌａｎｄ　ａｎｄ　ｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅＴｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｔｕｄｙ　ｓｉｍｕｌｔｎｅｏｕｓｌａｙ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　．ｈｅ　ｔＰ　Ｒ　ｇｅｎｅｓ　ａｒｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｈ　ｔｔｈｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ＳＯＷｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂａｓａｌ　ｄｉｓｃｉｐｌｉｎｅｓ　ｏｆ　ａｎｉｍａｌ　ａｎｄ　ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　ｓｃｉｅｎｃｅ；ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ—．ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ｔｉｓｓｕｅ；　ＲＴ－ＰＣＲ；ｐｉｇｓ　ｏ中固亳牧袈志