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脑动脉狭窄患者血清中炎性因子干扰素-γ、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的水平分析

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北京大学学报 ( 医学版) ・837・ JOURNAL OF PEKING UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES) Vo1.43 No.6 Dec.201 1 ・论著・ 脑动脉狭窄患者血清中炎性因子干扰素一 、 白细胞介素一6和肿瘤坏死因子一Ot的水平分析 梁建涛 ,王振宇 (1.北京大学第三医院神经外科,北京[摘100191;2.首都医科大学宣武医院神经外科,北京100053) 要]目的:研究不同类型脑动脉狭窄患者血清中干扰素(interferon,IFN)一 、白细胞介素(interleukin,IL)-6和 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)一o【的水平,分析这几种炎性因子在不同类型脑动脉狭窄患者血清中的变 化规律。方法:按脑动脉狭窄部位分为颅内狭窄组(26例),颅外狭窄组(30例),颅内、外混合狭窄组(27例)及单 纯大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)狭窄组(25例),另外包括对照人群33例。通过酶联免疫吸附试验(ell— zyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IFN一^y、IL一6和TNF一 的含量并采用SPSS 11.5统计分析软件 进行分析比较。结果:对血清中3种因子的检测发现,颅内狭窄组、颅外狭窄组、混合狭窄组和MCA狭窄组血清中 的IFN一 和IL-6均显著高于对照组(P=0.000),但在各狭窄组间IFN一 差异无统计学意义,而顷内狭窄组的IL-6 含量低于其他狭窄组(P<0.05)。对TNF— 的检测发现,只有颅内狭窄组和MCA狭窄组显著高于对照组(P< 0.05),而颅外狭窄组和混合狭窄组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:上述实验结果提示IFN一 、 IL一6和TNF一0【可能参与某些类型脑动脉狭窄的形成过程。 [关键词]脑动脉疾病;脑血管循环;干扰素 ;白细胞介素6;肿瘤坏死因子ot [中图分类号]R743 [文献标志码】A [文章编号]1671—167X(2011)06—0837-04 doi:10.3969/j.issn.1671—167X.2011.06.010 Serum levels of interferon。 ,interleukin一6 and tumor necrosis factor一0[in patients with cerebral arterial stenosis LIANG Jia13一tao 一.WANG Zhell—yu (1.Department of Neurosurgery,Peking University Third Hospital,Beijing 100191,China;2.Department of Neurosur— gery,Xuanwu Hospital of Capital Medical University,Beijing 100053,China) ABSTRACT Objective:To investigate the relationship between interferon一 (IFN一 ),interleukin一6(IL一 6),tumor necrosis factor. (TNF. )and cerebral arterial stenosis and to compare serum levels of these inflammatory eytokines in different cerebral arteries stenosis groups.Methods:According to the stenotie site.patients with cerebral arteries stenosis were divided into intracranial stenosis group(n=26),ex— tracranial stenosis group(rt=30),intraeranial and extracranial stenosis group(n=27),and group of stenosis in middle cerebral artery(/7,=25).And there were 33 samples in the control group.Blood serum IFN. .IL-6 and TNF.仪levels were analyzed using enzyme linked immunosorbent assays (ELISA).Results:Serum IFN一 and IL-6 1evels were signiifcantly increased in all the stenosis groups f P=0.000)as compared with the control group.But serum IFN. level had no signiifcant difference be— tween the two optional stenosis groups.And IL一6 leve1 in intraeranial stenosis group was Iower than those in the other stenosis groups(P<0.05).In addition.we found that TNF.仪of intraeranial stenosis group f P=0.001)and MCA stenosis group(P=0.015)signiifcantly increased as compared with the control group and the other two stenosis groups.Conclusion:The results suggest that IFN一 ,IL一6 and TNF一0【 are possible to participate in the formation of certain cerebral arterial stenosis. KEY WORDS Cerebral arterial diseases;Cerebrovascular circulation;Interferon—gamma;Interleukin一6; Tumor necrosis factor-alpha 动脉狭窄与动脉粥样硬化患者体内常常伴有严 重的炎症水平,而炎症反应则有多种炎性因子的共 仅]引发的炎症反应有关…。TNF基因位于主要组 织相容性复合体(major hist0c0mpatibility complex, 同参与,促使疾病发生、发展,如粥样硬化斑块破裂 的危险与前炎症因子[白细胞介素(interleukin, IL)-《5和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)一 A Corresponding author’s e-mail.byxwl@yahoo.cn MHC)的三类基因区,不仅与热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSPT0)基因座位紧邻,而且与血 清补体成分编码基因也相互紧邻。MHC免疫炎性 网络出版时间:2011.11—10 8:41:34网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/11.4691.R.20111l10.0841.005.html 北京大学学报( 医学版) JOURNAL OF PEKING UNIVERSITYf HEALTH SCIENCES) 基因会依赖多种MHC等位基因间的相互作用而发 挥功能心],同样也可参与炎症反应的发生并影响疾 病过程中的细胞状态。血清高水平的IFN一^y可间接 终止胶原合成从而削弱斑块的稳定性并导致血栓形 成 ]。本研究目的为探寻不同部位脑动脉狭窄患 者体内干扰素(interferon,IFN)一 IL-6和TNF—ol的 水平,主要采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对不同类型的脑动脉 狭窄患者血清进行检测,观察这几种炎性因子在不 理委员会许可并经患者签署知情同意后,从宣武医 院神经外科缺血组陆续取得经数字减影血管造影 (digital subtraction angiography,DSA)证实的脑动脉 狭窄患者血样,按动脉狭窄部位分为:颅内狭窄组 (In),颅外狭窄组(Out),颅内、外混合狭窄组(Mix) 及单纯大脑中动脉(middle cerebrla artery,MCA)狭 窄组(MCA) 。同期获得从宣武医院根据DSA、磁 共振血管造影(magnetic resonance angiography, MRA)、经颅多普勒超声(transcranial Doppler,TCD) 及颈部血管超声中的一项或两项检查排除颅内、外 同部位脑动脉狭窄患者体内的变化规律。 1资料与方法 动脉狭窄的对照人群(contro1)血样,对照组年龄 44~67岁。对各组间的年龄、性别比例、吸烟、饮酒、 高血压、糖尿病进行组间匹配后剔除部分样本以消 除这些因素带来的误差,各组情况具体见表1。 1.1研究对象 2008年在获得首都医科大学宣武医院医学伦 表1不同组中血清IFN- 、IL-6和TNF-d含量( ±S,ng/L) Table 1 Serum IFN- ,IL-6 and 11ⅣF— in diferent groups(x±5,ng/L) P=O.000,compared with Control group,each stenosis group has significant diference(IFN- and IL-6);}}compared with Control group,P= 0.000 1 between In group and Control group,and P:O.015 between MCA group and Control group(TNF—d).The other tWO stenosis groups had no sta— tistical difference. 1.2取材 份样本中相应细胞因子的浓度。 1.4统计分析 所有统计资料用均数-4-标准差( -4-s)表示。应 室温无菌采集4 mL肝素抗凝血,1 000 r/min 室温离心10 rain,EP管中加入Cocktail蛋白酶抑制 剂(1.25 mmol/L)5 L/支;取上清液1 mL分两支 用SPSS 1 1.5统计软件包进行统计分析。各组之间 先进行Oneway—ANOVA分析,观察是否存在组间差 异,之后在软件中再选择LSD检验。所有资料在分 析之前进行方差齐陛检验。P<0.05为差异有统计 学意义 2结果 (500 I/支)冻存于一8O℃待用。 1.3 ELISA检测IFN. 、IL.6和TNF一0【 ELISA试剂盒分别为:Human IFN. ELISA (SUNBIO,HEO02),Human IL-6 ELISA(SUNBIO, HEO03),Human TNF—OL ELISA(SUNBIO,HE001), 其中IFN-^y灵敏度为4 ng/L,IL-6和TNF. 灵敏度 为2 ng/L。按照说明书备好所有试剂及标准品,采 用标准程序,即每孔中加入100 标准品/样本,室 2.1标准曲线 曲线方程为Y=a+b・ +C・ +d・ 。对 IFN一 的检测:a=0.079,b=0.004,e=一8.75 X 温孵育2 h,去除液体,洗涤5次;每孔加入100 生物素化的相应一抗,室温孵育1 h,去除液体,洗涤 5次;每孔加入100 亲和素化.辣根过氧化物酶 (horseradish peroxidase,HRP),室温孵育30 min,去 10~,d:7.40×10一,相关系数r=0.998;对IL-6 的检测:a=0.089,b=0.O1l,C:一6.22 X 10~.d= 1.46×10~,相关系数r=0.996;对TNF.仪检测: a=0.060,b=0.004,c=一4.65 X 10.¨.d=2.41 X 除液体,洗涤5次;每孑L加入100 L四甲基联苯胺 (tetramethyl benzidine,TMB),室温孵育15 min,每 孔加入50 L终止液,在30 min内于450 nm处读 取光密度值(D)。按照相应因子标准溶液的浓度 lO~,相关系数r=0,998。 2.2 不同类型脑动脉狭窄患者与对照组血清中 IFN一 IL-6和TNF—ol的含量差异 (横坐标)和光密度(纵坐标)绘制标准曲线,计算每 各组血清IFN-^y、IL-6和TNF.OL含量(单位ng/ 北・京大学学报( 医学版) 840・ JOURNAL OF PEKING UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)Vo1.43 No.6 Dee.2011 增高,而TNF一 仅在颅内狭窄组和MCA狭窄组中 的增高具有统计学意义(P<0.O1),提示颅内狭窄 组和MCA狭窄组的患者发生中风的可能性会相对 高一些。 目前对于脑动脉狭窄形成的机制尚未完全明 thickens[J].Circulation,2001,103(13):1718—1720. [4]范常锋,黄一宁.2711例社区居民脑血管狭窄的流行病学调 查[J].中华老年心脑血管病杂志,2007,9(1):36—38. [5]Giacconi R,Caruso C,Lio D,et a1.1267 HSP70-2 polymorphism as a risk factor for carotid plaque rupture and cerebral ischaemia in old type 2 diabetes—atheorsclerotic patients[J].Mech Ageing Dev,2005,126(8):866—873. [6]Manginas A,Tsiavou A,Chaidaroglou A,et a1.Inflammatory cy- tokine gene variants in coronary artery disease patients in Greece 了,普遍观点认为是多因素、多基因交互作用所致的 结果,即一个特定的人群可能会携带一种或多种高 危险的基因型,而脑动脉狭窄的发生依赖于多种高 危险等位基因的相互作用 以及许多炎性因子间 的交互作用 J。本研究将脑动脉狭窄分成不同的 类型进行相关炎性因子的研究,可使我们进一步发 现所研究的因素与不同亚类脑动脉狭窄的关系,提 示参与不同类型脑动脉狭窄形成的主要炎性因子可 [J].Coron Artery Dis,2008,19(8):575—582. [7]Kleemann R,Zadelaar S,Kooistra T.Cytokines and atherosclero— sis:a comprehensive review of studies in mice[J].Cardiovasc Res,2008,79(3):360—376. [8]Profumo E,Buttari B,Tosti ME,et a1.Association of intracellular pro・-and anti—-inflammatory eytokines in peripheral blood with the clinical or uhrasound indications for carotid endarterectomy in pa— tients with carotid atherosclerosis[J].Clin Exp Immunol,2008, 152(1):120—126. [9]Sakamoto M,Minamino T,Toko H,et a1.Upregulation of heat shock trnscraiption factor 1 plays a critical role in adaptive cardiac 能会有所差异。那么结合临床症状,是否检测到IL. 6、IFN- 和TNF.ol含量超出正常范围就意味着存在 颅内动脉狭窄或单纯MCA狭窄?而只检测到IL.6 hypertophy[J].Cirrc Res,2006,99(12):1411—1418. 【1O l Asea A,Kraefi SK,Kurt—Jones EA.et a1.HSP70 stimulates cyto— kine production through a CD14-dependant pathway,demonstra— 和IFN・ 含量增高是否意味着颅外动脉狭窄或混合 狭窄的可能性大?这些问题尚需进一步增加样本量 进行相应的检测。 参考文献 Ikeda U.It0 T.Shimada K.Interleukin-6 and acute coronary syn. ting its dual role as a chaperone and cytokine[J].Nat Med, 2000,6(4):435—442. 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(2010-09—13收稿) of multiple gene interactions[J].Autoimmunity,2002,1(1— 2):29—35. lammation and thrombosis:the clot [3] Libby P,Simon DI.Inf(本文编辑:任英慧) 消 息・ 口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室获批建设 2011年10月9日,教育部转发了《国家发展改革委办 公厅关于口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室项目 效、自动”为目标的口腔数字化临床医疗技术、装备与材料; 以高技术手段提高临床医疗质量和水平,提高医疗效率,从 而尽可能地满足全社会日益增长的口腔医疗保健需求;力争 建成对国内外开放的,环境、设备和能力水平一流的,集口腔 医疗数字化技术与材料的应用研究、工程化开发、临床验证、 的复函》(发改办高技<2011>2255号),北京大学口腔医学 院申报的“口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室”获 批建设,这是北京大学医学部自1985年“天然药物及仿生药 物国家重点实验室”获批建设以来的第二个国家级实验室, 也是北京大学的第二个国家工程实验室。 标准研究、人才培养、国际交流和技术服务推广等多功能于 一体的研究与开发平台,成为推动我国口腔数字化医疗技术 (北京大学医学部科学研究处) 该实验室将从口腔临床医疗实际需求出发,采用最新的 科学与工程技术手段及材料,研究和开发以“精细、准确、高 和材料成果产业化的中间纽带与桥梁。 

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