复方抗疲劳缓释片中人参皂苷Re的含量测定

复方抗疲劳缓释片中人参皂苷Re的含量测定

曾󰀁倩,俞󰀁媛,纪󰀁晖

󰀁

󰀁

󰀁

󰀁󰀁[摘󰀁要]󰀁目的󰀁建立复方抗疲劳缓释片中人参皂苷Re的含量测定方法。方法󰀁采用高效液相色谱法,固定相:Shim-packCLC-ODS(4.6mm󰀁250mm,5󰀁m),流动相:乙腈-0.5%磷酸溶液(21󰀁79),柱温:26󰀁,流速:1.0ml/min,紫外检测波长:203nm。结果󰀁人参皂苷Re在0.01998~0.3996mg/ml范围内线性关系良好,标准曲线方程:A=7.173󰀁106C-26219,r=0.9999(n=6),平均加样回收率为104.2%(n=9),RSD为1.03%。结论󰀁该方法简便、快捷、准确,可用于复方抗疲劳缓释片中人参皂苷Re的含量测定。

󰀁󰀁[关键词]󰀁高效液相色谱法;复方抗疲劳缓释片;人参皂苷Re;含量测定

󰀁󰀁[中图分类号]󰀁R927.2󰀁󰀁󰀁[文献标志码]󰀁A󰀁󰀁󰀁[文章编号]󰀁1008-9926(2010)03-0250-03󰀁󰀁[DOI]󰀁10.3969/.jissn.1008-9926.2010.03.022

DeterminationofGinsenosideRein

CompoundAntifatigueSustained-releaseTablets

ZENGQian,YUYuan,JIHui

󰀁

󰀁

󰀁

󰀁

󰀁

DepartmentofPharmacy,NavyGeneralHospita,lBeijing100048,China;

SchoolofPharmacy,TheSecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China;󰀁

HealthDepartmentofNavyLogisticsDepartmen,tBeijing100841,China

󰀁󰀁[Abstract]󰀁ObjectiveToestablishahighperformanceliquidchromatographymethodfordeterminationofginsenosideReinCompoundAntifatigueSustained-releaseTablets.MethodsAhighperformanceliquidchromatog-raphymethodwasdeveloped.AkromasilC18columnwasusedwithamobilephaseofacetonitrile-0.5%phosphoricacid(21󰀁79).TheUVabsorbancewasmonitoredat203nm.ResultsThelinearrangeofginsenosideRewas0.01998-0.3996mg/m,lA=7.173󰀁10C-26219(r=0.9999,n=6),Themeanrecoverywas104.2%(n=9),RSD=1.03%.ConclusionThemethodisprovedtobesimple,fastandaccurate,andcanbeusedfordeter-minationofginsenosideReinCompoundAntifatigueSustained-releaseTablets.

󰀁󰀁[Keywords]󰀁highperformanceliguidchromatography;CompoundAntifatigueSustained-releaseTable;tgin-senosideRe;contentdetermination

󰀁󰀁中药抗疲劳的研究已成为当前研究的重点及热点,人参为五加科人参属植物人参(PanaxginsengC.A.Meyer)的干燥根,其茎、叶、花、果、须也供药用。现代医学证明,人参能滋补强身、抗衰老、抗缺氧、抗心律失常、增强免疫功能。人参皂苷是人参生物活性的主要物质基础。灵芝具有滋补强壮、扶正固本之功效。为延长作用时间、降低药物的不良反应、减少用药剂量及给药次数、提高患者服药的顺应性,笔者采用相关缓释辅料制备了人参茎叶总皂苷

和灵芝提取物的复方抗疲劳缓释片。

作者简介:曾󰀁倩,学士,主管药师。研究方向:医院药学。Te:l(010)66958330;E-mai:lzeqhr@lsina.com.cn作者单位:󰀁

100037北京,海军总医院药剂科;󰀁

200433上海,

6

󰀁󰀁许多含人参茎叶总皂苷的中药复方制剂均采用

[1-3]

人参皂苷Re为指标之一进行制剂质量控制。因此本文采用高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography,HPLC)法建立测定复方抗疲劳缓释

[4,5]

片中人参皂苷Re的含量,为制剂质量控制提供依据。1󰀁试剂和仪器

󰀁󰀁人参皂苷Re对照品(中国药品生物制品检定所),复方抗疲劳缓释片(每片含灵芝提取物30mg、人参茎叶总皂苷30mg,自制,批号:081111,081112,081113),甲醇、乙腈为色谱纯,水为娃哈哈纯净水,其余试剂均为分析纯。LC-20AD高效液相色谱仪(配有四元梯度系统,DAD检测器,日本岛津制作所)。

第二军医大学药剂学教研室;󰀁100841北京,海军后勤部卫生部

󰀁药学学报2010年6月20日第26卷第3期󰀁PharmJChinPLA,VOl.26,NO.3,Jun20,2010󰀁󰀁251󰀁

2󰀁方法和结果

2.1󰀁色谱条件󰀁色谱柱:Shim-packCLC-ODS柱(250mm󰀁4.6mm,5󰀁m),保护柱:DIKMAEasy-GuardC18(4.6mm󰀁10mm);流动相:乙腈-0.5%磷酸水溶液(21󰀁79);柱温:26󰀁;检测波长:203nm;流速:1.0ml/min。

2.2󰀁溶液的制备󰀁(1)对照品溶液󰀁精密称定人

参皂苷Re19.98mg,置5ml量瓶中,以甲醇溶解,定容,即得浓度为3.996mg/ml的人参皂苷Re对照品贮备液。精密吸取125󰀁l对照品贮备液,置5ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得浓度为0.0999mg/ml的对照品溶液。(2)供试品溶液󰀁取复方抗疲劳缓释片20片,研磨成细粉,准确称取研磨后的药粉48mg,置10ml具塞量瓶中,精密加入9.00ml甲醇,密封,25󰀁超声处理(功率600W,频率60kHz)30min,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,以3000r/min离心5min,取上清液,0.45󰀁m微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。(3)阴性对照溶液󰀁称取复方抗疲劳缓释片中缺人参茎叶总皂苷的灵芝提取物、亲水凝胶骨架材料及填充剂、润滑剂等成分,同(2)项下操作,即得阴性对照溶液。2.3󰀁专属性试验󰀁取阴性对照溶液、人参皂苷Re对照品溶液、供试品溶液各25󰀁l注入高效液相色谱仪,结果表明阴性对照对供试品中人参皂苷Re的出峰没有影响,理论塔板数按人参皂苷Re峰计大于3000。峰的分离度大于1.5,见图1。2.4󰀁线性关系考察󰀁精密吸取人参皂苷Re对照品贮备液适量,用甲醇稀释成浓度分别为19.98、49.95、99.9、199.8、299.7、399.6󰀁g/ml的溶液,取25󰀁l注入高效液相色谱仪,测定各溶液的峰面积,以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归,得回归方程:󰀁A=7.173󰀁10C-26219,r=0.9999(n=6)󰀁󰀁线性范围:0.01998~0.3996mg/ml。2.5󰀁精密度考察󰀁取浓度0.0999mg/ml人参皂苷Re对照品溶液,进样25󰀁,l重复6次,人参皂苷Re峰面积RSD为0.25%,表明方法精密度良好。2.6󰀁稳定性考察󰀁制备同一份供试品溶液(批号:081111),取25󰀁l注入高效液相色谱仪,分别于0、3、6、9、12、24h进样测定,人参皂苷Re峰面积的RSD为0.39%,表明样品在24h内稳定,2.7󰀁重复性考察󰀁精密称取样品(批号:081111)研磨后的药粉,共6份,分别为48.8、48.8、48.4、49.3、48.9、48.0mg,按2.2(2)项下制备6份供试

6

品溶液。取25󰀁l注入高效液相色谱仪,外标法计

算6份供试品溶液中人参皂苷Re的含量,计算得药粉中人参皂苷Re平均含量为0.0183g/g,RSD为1.22%,表明该试验方法重复性好。

A:阴性对照;B:对照品;C:供试品;1:人参皂苷Re

图1󰀁人参皂苷Re含量测定HPLC色谱图

2.8󰀁加样回收率试验󰀁精密称取(批号:081111)样品研磨后的药粉9份,置10ml量瓶中,分别精密加入低、中、高剂量的人参皂苷Re对照品贮备液,每个剂量各3份,样品处理和测定同2.7,测定数据和结果见表1。

表1󰀁加样回收率试验结果(n=9)

取样量样品量(mg)48.748.348.949.248.848.748.248.949.2

(mg)0.120.88390.490.90040.300.120.88210.490.9004

加入量(mg)0.63940.63940.63940.79920.79920.79920.95900.95900.9590

测得量(mg)1.56261.56021.56371.72571.71661.72511.88591.991.8826

回收率(%)105.0105.8104.6103.3103.0104.3104.7104.8102.4

104.2

1.0

x󰀁(%)

RSD(%)

(下转2页)

󰀁2󰀁󰀁药学学报2010年6月20日第26卷第3期󰀁PharmJChinPLA,VOl.26,NO.3,Jun20,2010󰀁

的蛇毒,经排毒导管、毒牙及伤口,沿淋巴及血液循

环扩散至全身,引起一系列中毒症状。神经毒型中毒主要表现为神经系统损害症状;血循毒型主要表现为血液及循环系统的中毒症状。严重者有惊厥、

[1,3-5]

昏迷、休克、呼吸麻痹、心跳骤停等。󰀁󰀁总医院第一附属医院是北方地区蛇伤救治中心。本文通过对120例应用血必净注射液治疗蛇咬伤患者的临床资料分析,血必净注射液对于改善蛇咬伤患者全身脏器损伤、脏器功能不全具有很好的疗效。季德胜蛇药片对于治疗蛇咬伤伤口局部肿胀、感染等具有独特的疗效。血必净注射液与蛇药联合应用,对于防治蛇咬伤患者早期炎症反应综合征、脏器功能不全、改善预后、缩短平均住院日等都具有重要的作用和临床意义。

󰀁󰀁血必净注射液主要由红花、赤芍、川芎、丹参、当归等中药材提取物组成,其机理很可能不在于对蛇毒的灭活,而在于排毒。本研究的结果表明,血必净注射液除了明显改善蛇伤患者的全身炎症反应,还对蛇毒所造成的脏器损伤有很好的保护作用,能明显改善肝功能、心肌损伤,研究表明,血必净注射液的主要成分红花黄色素能有效抑制血小板聚集而引起的凝血功能障碍。本研究的结果提示血必净注射液对蛇伤患者肾功能似乎没有保护作用,而肾脏是蛇毒的主要靶器官,

(上接251页)

[4]

因此血必净对抗蛇毒蛇伤患者的全身损害作用仍需要在机制上进一步深入研究。

󰀁󰀁用中药治疗毒蛇咬伤的早期解毒和恢复期疗效较好;危重型患者的抢救及其并发症的防治,必须应用西医的综合对症治疗措施才能提高治愈率。对于蛇咬伤时间过长,延误早期治疗,已经出现严重多器官功能障碍,如尿毒症、休克等严重并发症患者,应在条件允许时及早行血液透析治疗,以免耽误病情。

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志,2008,20(3):232-235

(收稿日期:2010-05-07;修回日期:2010-05-12)

[5]

(本文编辑󰀁梁爱君)

物和其他人参皂苷的吸收峰均能达到较好的分离,没有干扰,方法简便,灵敏度高,有较好的稳定性及重复性,可作为该制剂的质量控制方法。

[参考文献]

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(收稿日期:2010-01-30;修回日期:2010-04-28)

2.9󰀁样品含量测定󰀁取本品20片,照2.2(2)项下制备样品溶液,取25󰀁l注入高效液相色谱仪,外标法计

算供试品溶液中人参皂苷Re的含量,结果见表2。

表2󰀁人参皂苷Re的含量测定结果

批号081111081112081113

含量(mg/g)

18.3017.8717.36

3󰀁讨论

󰀁󰀁人参皂苷Re的HPLC测定方法已有一些报道,但是有些需要较特殊的蒸发光散射检测器,有些

[1,4,6]

需要采用流动相梯度洗脱,对设备要求较高,方法不易普及,还有些供试品提取处理较复[1,2,6,7]杂,操作不便。本试验对不同超声时间10、20、30、45min进行了考察,发现超声处理30min后,人参皂苷Re含量不再增加,故本文采用30min超声处理。并对文献的色谱条件进行适当调整,在本文所采用的试验条件下,样品峰与辅料、灵芝提取

[7]

(本文编辑󰀁梁爱君)