维生素C制剂的鉴别、检查、含量测定

2010级药学一班 陶磊 2010102135

[摘要] 维生素C (Vitamin C ，Ascorbic Acid)又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，能够治疗坏血病并且具有酸性。在化学结构上和糖类十分相似，有4种光学异构体，其中以L-构型右旋体生物活性最强。ChP2010收载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、颗粒剂、泡

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腾颗粒剂、注射剂和复方制剂维生素C银翘片。本文通过查阅文献资料总结了维生素C原料药及各种剂型的鉴别，杂质检查，含量测定，并结合实验室实际情况确定实验方法。 [关键词]维生素C；鉴别；杂质检查；含量测定

1 仪器及试剂

1.1仪器 7型紫外可见分光光度计；高效液相色谱仪；电炉；250 mL碘量瓶；分析天平；电子天平；碱式滴定管；移液管等。 1.2试剂 0.1 mol/L HNO3、银试液（0.1 mol/L AgNO3）、0.05 mol/L H2SO4、0.1 mol/L HCl、二氯靛酚钠、稀、草酸、氢氧化钠试液、氯化钙试液、盐酸、淀粉指示液、碘滴定液、0.05%亚甲蓝乙醇液、醋酸盐缓冲液（pH=3.5）、碱性酒石酸铜、标准铁溶液、标准铜溶液、醋酸铵、醋酸钠、醋酸、磷酸二氢钾, 均为分析纯; 甲醇、乙腈, 为色谱纯; 蒸馏水,维生素C对照品等。部分试剂的配制如下：

（1）淀粉指示剂：称取0.5 g可溶性淀粉，加水5 mL搅拌均匀，缓缓加入100 mL沸水中，边加边搅拌，煮沸2 min，放冷，取上清液，应新鲜配制。 （2）稀醋酸：量取冰醋酸6 mL，加水定容至100 mL。 （3）碱性酒石酸铜：称取硫酸铜结晶6.93 g,加水溶解定容至100 mL；称取酒石酸碱钠34.6 g,氢氧化钠10 g,加水溶解定容至100 mL；用时等量混合。

2 方法

2.1 鉴别

2.1.1与银反应: 除维生素C钙、维生素C钠、维生素注射液、维生素C银翘片，其余制剂均可用此方法。

取维生素C 0.2 g,加水10 mL溶解。取该溶液5 mL，加银试液0.5 mL,即生成金属银的黑色沉淀。

2.1.2与二氯靛酚钠反应：除维生素C注射液和维生素C钠制剂，其余均可用此方法。

（1）取维生素C 0.2 g，加水10 mL溶解。取该溶液5 mL，加二氯靛酚钠1～2滴，试液的颜色即消失。

（2）取维生素C银翘片10片，除去糖衣，精密称定，研细，混匀，充分研磨，精密称定适量(约相当于维生素C 0.2 g)，置100 mL量瓶中，加新煮沸的冷开水10 mL、稀醋酸10 mL，振摇使充分溶解，用水稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液适量，用氨试液调节pH至中性，加入适量活性炭（每30mL续滤液中加0.5 g活性炭），加热至沸，滤过。取二氯靛酚钠试液数滴置点滴板，滴加滤液数滴，试液的蓝色即消退。 2.1.3与其他氧化剂的反应：

（1）取维生素C注射液，用水稀释制成l mL 中含维生素C l0 mg的溶液，取4 mL，加0.l mol/L的盐酸溶液4 mL，混匀，加0.05 %亚甲蓝乙醇溶液4滴，置4 0 ° C水浴中加热，3分钟内溶液应由深蓝色变为浅蓝色或完全褪色。

（2）取维生素C钠水溶液4mL，加0.1mol/L盐酸溶液1mL，加碱式酒石酸铜试液数滴，加热，生成红色沉淀。

2.1.4薄层色谱法：此方法主要用于维生素C 制剂的鉴别。

（1）取维生素C颗粒细粉适量（ 约相当于维生素C l0mg)，加水10 mL，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C 对照品， 加水溶解并稀释制成l mL 中约含l m g 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述两种溶液各2uL,分别点于同一硅胶GF2薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（1)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（2 nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

（2）取维生素C注射液，用水稀释制成l mL中含维生素C l mg 的溶液，作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成l mL中约含l m g 的溶液， 作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 uL，分别点于同一硅胶GF2薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（1 )为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（2 nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

（3）取维生素C颗粒细粉适量（ 约相当于维生素C l0 mg)，加水10 mL，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C 对照品， 加水溶解并稀释制成l mL中约含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录V B)试验，吸取上述两种溶液各2 uL,分别点于同一硅胶G F 2 5 4薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（1)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（2 nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

（4）取维生素C泡腾颗粒细粉适量（ 约相当于维生素C lO mg)，加水10 mL，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C 对照品， 加水溶解并稀释制成l mL中约含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 uL，分别点于同一珪胶GF2薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（1)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（2 nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

（5）取维生素C泡腾片细粉适量（ 约相当于维生素C Lo mg)，加水10 mL，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C 对照品， 加水溶解并稀释制成l mL中约含l m g 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 uL，分别点于同一硅胶GF2薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（1)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（2 nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

2.1.5紫外光谱法：维生素C在0.01 mol/L盐酸溶液中在243 nm波长处有惟一的最大吸收，可采用此方法进行特征鉴别。

2.1.6红外光谱法：维生素C的原料药的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集450图）一致。维生素C的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集1039图）一致。维生素C的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集451图）一致。

2.2 杂质检查

ChP2010规定应检查维生素C及其片剂、注射剂的澄清度与颜色，对维生素C原料中的铜、铁离子进行检查，对维生素C 及其注射液进行草酸检查。 2.2.1溶液的澄清度与颜色检查

（1）取维生素C供试品3.0 g ，加水15 mL，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420 nm的波长处测定吸光度，不得过0.03。维生素C制剂在加工过程中有色杂质增加，限量比原料药宽一些，维生素C片的测定波长为440 nm。

（2）取维生素C注射液，用水稀释制成每lml中含维生素C 50 mg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在420 nm的波长处测定，吸光度不得过0.06。

（3）取维生素C 细粉适量（ 相当于维生素C l.0 g)，加水20 mL ，振摇使维生素C溶解，滤过，滤液照紫外-可见分光光度法, 在440 nm的波长处测定吸光度，不得过0.07。

（4）取维生素C钙3.0 g，加水30 mL使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420 nm的波长处测定吸光度，不得过0.06。

（5）取维生素C钠l.0 g ，加水10 mL使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420 nm的波长处测定吸光度，不得过0.06。 2.2.2草酸的检查

（1）取维生素C原料药0.25 g ，加水4.5 mL, 振摇使维生素C 溶解，加氢氧化钠试液0.5 mL、稀醋酸l mL 与氯化钙试液0.5 mL ，摇匀，放置1小时，作为供试品溶液；另精密称取草酸75 mg，置500 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，加稀醋酸1 mL与氯化钙试液0.5 mL，摇匀，放置1小时，作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照溶液（0. 3 % )。

（2）取维生素C注射液，用水稀释制成每1 mL中含维生素C 50 mg 的的溶液，精密量取 5 mL，加稀醋酸 1mL 与氯化钙试液 0.5 mL，摇匀，放置1小时，作为供试品溶液；精密称取草酸75 mg ，置500 mL量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，加稀醋酸 1ml 与氯化钙试液 0.5 mL，摇匀，放置 1小时 ，作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照溶液（0.3%）。 （3）维生素C钠0.25 g ，加水5.0 mL，振摇使溶解，加稀醋酸l mL与氯化钙试液0 . 5 mL，摇匀，放置1小时，作为供试品溶液；精密称取草酸75 mg，置500 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，加稀醋酸l mL与氯化钙试液0.5 mL,摇匀，放置1小时，作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照溶液（0. 3 % )。 2.2.3铁、铜离子的检查

（1）取维生素C原料药5 . 0 g 两份，分别置2 5 mL量瓶中，一份中加0. l m o l / L溶液溶解并稀释至刻度，摇匀,作为供试品溶液（B)；另一份中加标准铁溶液（精密称取硫酸铁铵863 mg，置1000 mL量瓶中，加lmol/L硫酸溶液25ml，用水稀释至刻度，摇匀， 精密量取10 mL, 100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀）1.0 mL，加0. l mol/L溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（A ) 。照原子吸收分光光度法，在248. 3nm的波长处分别测定，应符合规定[若A和B溶液测得吸光度分别为a和b，则要求b<(a-b)]。 （2）取维生素C原料药2.0 g两份，分别置25 mL量瓶中，一份中加0. l mol /L溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（B）;另一份中加标准铜溶液（精密称取硫酸铜393 mg，置1000 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀）1.0 mL，加0. l mol /L溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(A)。照原子吸收分光光度法,在324.8 nm的波长处分别测定，应符合规定[若A和B溶液测得吸光度分别为a和b，则要求b<(a-b)]。

2.3 含量测定

目前已有一些文献综述了对维生素C 的测定方法, 常用的方法有光度法〔2-3〕 、电化学

法、滴定法、酶法4、色谱法5 、差示旋光法等。

2.3.1碘量法：ChP2010采用本法对维生素C原料、片剂、颗粒剂、泡腾颗粒剂、泡腾片、注

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射剂及维生素C银翘片进行含量测定。为消除辅料对测定的干扰，滴定前要进行必要的处理。如片剂溶解后应滤过，取续滤液测定；注射液测定前应加丙酮2 mL，以消除抗氧化剂亚硫酸氢钠对测定的影响。 （1）取维生素C原料药约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100 mL 于稀醋酸10 mL 使溶解， 加淀粉指示液l mL , 立即用碘滴定液（0.05 mol /L )滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪， 每l mL碘滴定液（0. 05 mol /L ) 相当于8.806 m g 的C6H8O6。

（2）取维生素C片20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素C 0.2 g)，置100 mL量瓶中，加新沸过的冷水100 mL与稀醋酸10 mL的混合液适量，振摇使维生素C溶解并稀释至刻度，摇匀，迅速滤过，精密量取续滤液50 mL ，加淀粉指示液l mL，立即用碘滴定液（0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续3 0秒钟不褪。每l mL碘滴定液（0.05 m o l /L )相当于8.806mg的C6H8O6。

（3）精密量取维生素C注射液适量（ 约相当于维生素C 0.2 g )，加水15 mL与丙酮2 mL ，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4 mL与淀粉指示液l mL，用碘滴定液（0.05 mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续3 0秒钟不褪。每l mL碘滴定液（0.05mol/L)相当于8.806 mg 的C6H8O6。 （4）取维生素C银翘片10片，除去糖衣，精密称定，研细，混匀，充分研磨，精密称定适量(约相当于维生素C 0.2 g)，置100 mL量瓶中，加新煮沸的冷开水10 mL、稀醋酸10 mL，振摇使充分溶解，用水稀释至刻度，摇匀滤过，精密量取续滤液50 mL，加淀粉指示液l mL，立即用碘滴定液（0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续3 0秒钟不褪。每l mL碘滴定液（0.05 mol /L )相当于8.806 mg的C6H8O6。该品每片含维生素C（C6H8O6）应为标示量的90.0%～110.0%。 2.3.2二氯靛酚滴定法：本法的专属性较碘量法高，多用于维生素C制剂的含量分析。 精密量取维生素C口服液适量（约相当于维生素C 50 mg）,置100 mL量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20 mL，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于维生素C 2 mg），置50 mL锥形瓶中，加偏磷酸-醋酸试液5 mL,用二氯靛酚滴定液滴定至溶液显玫瑰红色，并持续5秒不退色；另取偏磷酸-醋酸试液5.5 mL，加水15 mL，用二氯靛酚滴定液滴定，作为空白校正。以二氯靛酚滴定液对维生素C的滴定度计算，即得。

2.3.3高效液相色谱法

维生素C银翘片的含量测定6

维生素C标准液的配制：精密称取维生素C对照品0. 0241 g,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得对照品液. 流动相的配制：精密称取1.16 g 醋酸铵,加入1000 mL 蒸馏水使其溶解,量取330 mL,加入670 mL 甲醇,10 mL 醋酸,混匀,用0.45 um 滤膜滤过,超声脱气10 min.

色谱条件:色谱柱Krosmasil C18( 4. 6 mm×250 mm, 5 um);流动相:甲醇-醋酸(0.02mol/ L)醋酸(体积比67:33:1);流速0.8 mL/ min;检测波长: 249 nm; 柱温: 20℃;进样量:20 uL,灵敏度:1.0000 AUFS.

试液的配制及测定:避光操作, 取样品10片,除去糖衣,精密称定,研细,精密称取适量( 约相当于维生素C 0.2 g),置于100 mL的量瓶中,加甲醇30 mL,超声振荡10 min,使充分溶解, 用新煮沸的冷蒸馏水稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 mL,置50 mL 量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀,精密吸取上述溶液20 uL 注入液相色谱仪,测定.

维生素C银翘片的测定还可以采用红外漫反射光谱技术、双波长分光光度法、紫外可见

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分光光度法、阻抑退色光度法7、荧光分析法8。

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3 讨论

实验方法有很多，需要结合实验室的条件来选择适合的方案，实际操作过程中掌握实验操作的关键技能，通过实验掌握维生素C的理化性质、鉴别、杂质检查、及含量测定的方法。

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