PEG收集沉淀病毒的方法

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PEG收集沉淀病毒的方法

1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；

2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。 3、4过夜或放置一段时间；

4、8000r/min离心30分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀加入适量的PBS中，4℃过夜； 6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。

取100mL毒液，10000r/min，10min，取上清。上清中加入10Gpeg-20000和2gNaCl4℃溶解过夜，20000r/min，离心30min，弃上清，留沉淀。沉淀用3ml无菌PBS重悬，转入透析袋中，2L预冷PBS透析液4℃透析，每4h换一次液，到第三次过夜透析。将透析袋放入平皿中，覆盖蔗糖浓缩至1.5ml，500μl1支分装至EP管中。-80℃备用。

将细胞反复冻融3次后，则获得病毒液。取500mL病毒液，于4℃2000rpm离心10min，取上清；在超净工作台中，向上清中加入PEG6000和10gNaCl，边加边轻轻搅拌混匀，于4℃溶解过夜（注意要溶解完全，防止有未溶解的PEG）；于4℃8500g离心30min，弃上清，留取沉淀；沉淀用1.5mL无菌的PBS重悬，转入透析袋中，置于2L的预冷的PBS中进行透析，每4h更换一次透析液，至第3次时透析过夜；用蔗糖进行浓缩，500μL/每支分装到EP管中，-80℃保存；采用紫外分光光度计和BCA进行蛋白定量，定量结果为20.5mg/mL。

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