第３２卷第４期 ２００８年８月 南昌大学学报（理科版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ） Ｖｏ１．３２ Ｎｏ．４ Ａｕｇ．２００８ 文章编号：１００６一ｏ４６４（２００８）０４—０３８５—０４ Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统在乳杆菌鉴定中的应用 曾哲灵，罗 敏，梁丽军 （南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌 ３３００４７） 摘要：利用Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统，对３种乳杆菌进行鉴定分析。结果表明：Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统可 快速测定出供试乳杆菌菌株的特性参数（ＰＲＯＢ、ＳＩＭ、ＤＩＳＴ）和供试乳杆菌菌株对９５种碳源的利用情况，并可直接 根据供试乳杆菌菌株的特性参数将供试乳杆菌菌株准确鉴定到乳杆菌属水平、部分供试乳杆菌菌株准确鉴定到种 水平。根据供试乳杆菌菌株的特性参数，结合供试乳杆菌菌株对９５种碳源的利用情况，可将所有供试乳杆菌菌株 准确鉴定到种水平。可作为乳杆菌制品质量控制及快速鉴定的有效手段。 关键词：Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统；乳杆菌；鉴定 中图分类号：Ｑ９３—３３１ 文献标识码：Ａ 干酪乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｃｉ）、类于酪乳杆菌 ｍＬ，Ｋ２ＨＰＯ４ ２ ｇ，ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ ０．２５ ｇ，蒸馏水 １ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．２。 （ＬａｃｔｏｂａｃｉＵｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）及鼠李糖乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌ— ｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）均为乳杆菌属细菌，是常见的益生 １．３ ＢＵＡ＋Ｂ培养基 菌，其种的分类学地位是随着分类学技术的发展而 变迁的 。 按制备１ ０００ ｍＬ培养基计，称取５１．７ ｇＢＵＡ培 养基，９５０ ｍＬ纯净水、蒸馏水或去离子水置于容器 随着仪器分析技术的进步和计算机的广泛应 用，微生物菌种鉴定已进入基于仪器自动化分析阶 段 。Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统是近２０年才推 中，轻微煮沸，搅拌以溶解琼脂和其它组份；冷却后 调整ｐＨ值至７．２±０．１（２５ ＱＣ）；１２１℃灭菌１５ ｒａｉｎ； 冷却至４５～５０℃，加５０ ｍＬ新鲜的脱纤羊血，摇匀， 倒平板。 １．４仪器设备 出的商品化微生物自动鉴定系统，该系统主要是根 据细菌对９５种碳源的利用情况及其数据库内信息， 经计算机分析比较，实现对待测菌的鉴定，已成为国 际上细菌分类鉴定的常用技术手段 一。本实验采 用Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统对已知干酪乳杆菌、 类干酪乳杆菌类＝Ｆ酪亚种及鼠李糖乳杆菌进行复核 鉴定，分析该系统在这３种乳杆菌鉴定中的应用效 果 Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统（Ｂｉｏｌｏｇ读数仪和 ４．２版Ｂｉｏｌｏｇ Ｍｉｃｒｏｓｔａｔｉｏｎ系统），浊度计，８头电动 移液器，厌氧手套箱，超净工作台，恒温培养箱，厌氧 培养罐，厌氧菌鉴定微平板，厌氧菌浊度标准管，厌 氧菌接种液试管等。 １．５数据测定 １材料与方法 １．１供试菌株 １．５．１ 菌株复活在厌氧手套箱中，从供试乳杆菌 菌株，在ＭＲＳ液体培养基中活化两代，然后在ＢＵＡ ＋Ｂ平板上划线，３７ ｃ【＝厌氧条件下培养４８ ｈ。 供试乳杆菌菌株为干酪乳杆菌ＡＴＣＣ ３９３ 、 ＡＴＣＣ １５００８、ＪＣＭ ８１２９，类干酪乳杆菌类干酪亚种 ＪＣＭ １０５３、ＪＣＭ １１１１，鼠李糖乳杆菌ＮＢＲＣ ３４２５ 、 ＡＴＣＣ ８５３０、ＡＴＣＣ １０８６３、ＡＴＣＣ １１９８１、ＡＴＣＣ ５３１０３。 １．５．３菌悬液制备在超净工作台中，使用无菌棉 签从在ＢＵＡ十Ｂ平板表面蘸取菌体，转入厌氧菌接 种液试管内，翻转厌氧菌接种液试管，令菌体扩散到 厌氧菌接种液中，并插入浊度计读数，若读数＞（６７ ４－１）％，则继续加人菌体，若读数＜（６７±１）％，则 加入厌氧菌接种液，直至浊度计读数达到（６７± １）％。 １．２ ＭＲＳ培养基 蛋白胨１０ ｇ，葡萄糖２０ ｇ，酵母浸膏５ ｇ，乙酸钠 ５ ｇ，柠檬酸氢二铵２ ｇ，牛肉膏１０ ｇ，Ｔｗｅｅｎ一８０ １ １．５．４ 厌氧菌鉴定微平板的接种 在超净工作台 收稿日期：２００８—０３—２５ 基金项目：江西省重点科技计划资助项目（赣科发计字（２００６）５３号） 作者简介：曾哲灵（１９６５一），男，博士，教授． 南昌大学学报（理科版） ２００８拄 中，打开厌氧菌鉴定微平板上盖，用８头电动移液器 将制备好的菌悬液接种到厌氧菌鉴定微平板的各孔 内，每孔１００ ＩｘＬ，共９６孔，然后盖上盖子，并在有氧 条件下静置１０～１５ ｍｉｎ，再放人厌氧环境中３７℃培 养。 中各鉴定结果（ＩＤ）均对应可能性Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ （ＰＲＯＢ）、相似性Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ（ＳＩＭ）和位距Ｄｉｓｔａｎｃｅ （ＤＩＳＴ）３个重要参数。 ２结果与分析 ２．１供试乳杆菌菌株的参考鉴定结果【ＩＤ ｕｓＴ）的 特性参数分析和系统默认鉴定 １．５．５微平板读数１．６数据分析 厌氧培养２０～２４ ｈ后，取出 厌氧菌鉴定微平板，放人Ｂｉｏｌｏｇ读数仪中读取数据。 Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统的鉴定结果由ＩＤ ｌ０株供试乳杆菌菌株ＩＤ１和ＩＤ２的主要特性 参数列于表１中。系统默认ＰＲＯＢ值最高的ＩＤ１为 ｂｏｘ（系统默认鉴定结果）、ＩＤ Ｌｉｓｔ（系统根据最相近 最佳鉴定结果，供试乳杆菌菌株系统默认鉴定结果 原则给出的参考鉴定结果）和ＭｉｃｒｏＰｌａｔｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ 列于表２中 （被鉴定菌株的碳源利用情况）３部分组成，ＩＤ ｌａｓｔ 表１ １０株供试乳杆菌菌株ＩＤ１和ＩＤ２的主要特性参数 菌株编号 可参考结 果ＩＤ１ ＰＲＯＢ／％ＳＩＭ ＤＩＳＴ ＩＤ２ ＰＲＯＢ／％ＳＩＭ ＤＩＳＴ 表２供试乳杆菌菌株系统默认鉴定结果 按照Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统规定 Ｊ，４．２ 考结果。 版Ｂｉ０Ｉｏｇ、Ｍｉｃｍｓｔａｔｉｏｎ系统默认ＰＲＯＢ值最高的ＩＤ１ 根据表Ｉ和表２可知：菌株ＡＴＣＣ ３９３ 。、ＪＣＭ 为最佳鉴定结果；当ＳＩＭ等于１．００，或者ＳＩＭ值＞ ８１２９ ＪＣＭ １０５３ ＮＢＲＣ ３４２５ ＡＴＣＣ ８５３０、ＡＴＣＣ ０．５，且ＩＤ１与ＩＤ２的ＤＩＳＴ值相差２．０以上时，ＩＤ１ １０８６３、ＡＴＣＣ １１９８１可参考结果中ＩＤ均准确可信， 准确可信，采纳系统默认鉴定结果；当ＩＤ１的ＳＩＭ值 且Ｂｉｏｌｏｇ系统默认鉴定结果与菌株原名称相符；菌 接近０．５，或者ＩＤ１与ＩＤ２的ＤＩＳＴ值相差不到２．０ 株ＡＴＣＣ １５００８、ＪＣＭ １１１１、ＡＴＣＣ ５３１０３△ＤＩｓＴ＜ 时，不采纳系统默认鉴定结果，ＩＤ１和ＩＤ２均作为参 ２．０，不能准确鉴定到种，ＩＤ１和ＩＤ２均作为参考结果， 第４期 曾哲灵等：Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统在乳杆菌鉴定中的应用 ・３８７・ 且Ｂｉｏｌｏｇ系统默认鉴定结果与菌株原名称不相符。 ２．２供试乳杆菌菌株的碳源利用分析及进一步区 分鉴定 续表３ １０株供试乳杆菌菌株对９５种碳源的利用 ９６微孔及名称 Ｄ２ １３一甲基一Ｄ一半乳糖苷 Ｄ３ ０【一甲基一Ｄ一葡萄糖苷 Ｄ４ Ｂ一甲基一Ｄ一葡萄糖苷 Ｄ５异麦芽酮糖 Ｄ６ Ｄ一棉子糖 Ｄ７鼠李糖 一 ＋ ＋ 一Ｄ８水杨苷 ＋ ＋ 一 ＋ ＋ 一１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ ＋＋＋一一＋＋＋＋＋ Ｂｉｏｌｏｇ厌氧菌鉴定微平板有９６个微孑Ｌ，编号为 ｂ ｂ ｂ—．—． ＋＋＋一一十４－—．．４－ｂ ＋＋＋＋ Ａ１一Ｈ１２，其中Ａｌ为水，Ａ２一Ｈ１２分别为４８种糖、 醇类及其衍生物，２２种有机酸，１９种氨基酸和６种 核苷酸，共９５种碳源。 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ ＋＋＋ｂ ｂ ｂ十一ｂ一 一一一一一＋＋＋＋＋ ＋ 一 １Ｏ株供试乳杆菌菌株对Ｂｉｏｌｏｇ厌氧菌鉴定微 一 ＋＋ ＋ ＋一 ＋＋ ＋＋一＋＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ 平板９５种碳源的利用情况列于表３中。 表３ １０株供试乳杆菌菌株对９５种碳源的利用 ９６微孔及名称 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ Ａｌ水 一一一一一 Ａ２ Ｎ一乙酰一Ｄ一半乳糖胺 ＋一十ｂ ｂ ＋＋＋ Ａ３ Ｎ一乙酰一Ｄ一葡糖胺 ＋＋＋＋＋ ＋＋＋ Ａ４ Ｎ一乙酰～Ｂ—Ｄ甘露糖 ＋＋＋ｂ＋ 一＋＋ Ａ５戊五醇 一一一一一 Ａ６苦杏仁苷 ＋ｂ＋一＋ ＋＋＋ Ａ７ Ｄ一阿糖醇 一一一一一 Ａ８熊果苷 ＋＋＋＋＋ ＋＋＋ Ａ９ Ｄ一纤维二糖 ＋＋＋＋＋ ＋＋＋ Ａ１０ ｏ【一环糊精 一一一一一 ＡＩ１ Ｂ一环糊精 一一一一一 ＡＩ２糊精 ｂ＋ｂ＋＋ ＋＋＋ Ｂｌ甜醇 一一一一一 Ｂ２ ｉ一赤藻糖醇 Ｂ Ｂ ｂ一一 ～＋ｂ Ｂ３ Ｄ一果糖 ＋＋＋＋＋ ＋＋＋ Ｂ４ Ｌ一海藻糖 一一一一一 Ｂ５ Ｄ一半乎Ｌ糖 ＋＋＋＋＋ ＋＋＋ Ｂ６ Ｄ一半乳糖醛酸 ＋ｂ十一一 ～＋＋ Ｂ７龙胆二糖 ＋ｂ十一＋＋ ＋＋ Ｂ８ Ｄ一葡萄糖酸 ＋＋＋＋＋ ＋＋＋ Ｂ９ Ｄ一葡糖胺酸 一一一一一 Ｂ１０ ｏ【一Ｄ一葡萄糖 ＋＋＋＋＋ ＋＋＋ ＢＩ１ Ｏ／．一Ｄ一葡萄糖一１一磷酸一一一一一 Ｂ１２ Ｄ一葡萄糖一６一磷酸 ＋ｂ ｂ一一 一ｂ ｂ ｃ１甘油 ｂ—ｂ一一 ＋＋＋ Ｃ２ Ｄ，Ｌ—ｄ磷酸甘油 ｂ—ｂ一一ｂ— ，．ｂ—— Ｃ３ ｍ一肌醇 一一一一一一一 Ｃ４ ｏ【一Ｄ一孚Ｌ糖 ＋＋＋十一＋＋ ｂ＋一 ｃ５孚Ｌ果糖 ＋＋＋十一＋＋ ｃ６麦芽糖 ＋＋＋＋＋＋＋ ＋＋＋ ｃ７麦芽三糖 ＋＋＋ｂ ｂ一＋ Ｃ８ Ｄ一甘露醇 ＋＋＋＋＋＋＋ ＋＋＋ Ｃ９ Ｄ一甘露糖 ＋＋＋＋＋＋＋ ＋＋＋ Ｃ１０ Ｄ一松三糖 ＋＋＋一一＋＋ ＋＋一 Ｃｌ１ Ｄ一蜜二：糖 一一一一一ｂ＋ 一ｂ ｂ Ｃ１２ ３一甲基一Ｄ一葡萄糖 ｂ ｂ ｂ一一＋＋ 一＋＋ Ｄ１ ａ一甲基一Ｄ一半乳糖苷 ｂ ｂ ｂ一一ｂ一 ——ｂ—． ＋ Ｄ９ Ｄ－【＋ ＋ ＬＩ梨醇 一＋ 一 ＋ ＋ 一＋一 ＋＋ ＋ 一＋ 一＋＋＋ ＋一 ＋＋ ＋＋ ＋ 一Ｄ１０水苏糖 Ｄ１ｌ蔗糖 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｄ１２ Ｄ一海藻糖 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｅｌ松二糖 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｅ２乙酸 Ｅ３甲酸 Ｅ４反丁烯二酸 Ｅ５乙醛酸 Ｅ６ 一羟丁酸 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｅ７ Ｂ一羟丁酸 Ｅ８衣康酸 Ｅ９ 一丁酮酸 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｅｌ０ ｄ一戊酮酸 ＥｌＩ Ｄ，Ｌ一孚Ｌ酸 ＋＋十一一４＂－＋一＋＋ Ｅｌ２ Ｌ一乳酸 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｆｌ Ｄ一孚Ｌ酸甲基酉 ＋十＋一一－Ｉ－ｂ一一十 Ｆ２ Ｄ一苹果酸 Ｆ３ Ｌ一苹果酸 一一～一４－＋＋一４－＋ Ｆ４丙酸 Ｆ５丙酮酸 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｆ６丙酮酸甲基酯 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｆ７ Ｄ一葡萄糖二酸 Ｆ８琥珀酰胺酸 Ｆ、９琥珀酸 Ｆ１０琥珀酸单甲基酯 Ｆ１１ ｍ一酒石酸 ＦＩ２尿刊酸 Ｇｌ丙胺酰胺 Ｇ２ Ｌ一丙氨酸 Ｇ３ Ｌ一丙氨酰一Ｌ一谷胺酰胺 Ｇ４ Ｌ一丙氨酰一Ｌ一组氨酸 Ｇ５ Ｌ一丙氨酰一Ｌ一苏氨酸 Ｇ６ Ｌ一天门冬酰胺， Ｇ７ Ｌ一谷氨酸 Ｇ８ Ｌ一谷氨酰胺 Ｇ９甘氨酰一Ｌ一天门冬氨酸 Ｇ１０甘氨酰一Ｉ 一谷氨酰胺 Ｇｌ１甘氨酰一Ｌ一甲硫胺酸 Ｇ１２甘氨酰一Ｌ一脯氨酸 ＋ 一 ＋ 一 ・３８８・ 南昌大学学报（理科版） ２００８拄 续表３ １０株供试乳杆菌菌株对９５种碳源的利用 ９６微孔及名称 Ｈ１ Ｌ一蛋氨酸 Ｈ２ Ｌ一苯丙氨酸 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ 一一一一一一一一一一 一一一一一一一一一一 ３ 结 论 Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动分析系统可快速测定出供试 乳杆菌菌株的特性参数（ＰＲＯＢ、ＳＩＭ、ＤＩＳＴ）和供试 乳杆菌菌株对９５种碳源的利用情况，并可直接根据 Ｈ３ Ｌ一丝氨酸 Ｈ４ Ｌ一苏氨酸 Ｈ５ Ｌ一缬氨酸 一一一一一一一一一一 一一一一一一一一一一 一一一一一一一一一一 供试乳杆菌菌株的特性参数将供试乳杆菌菌株准确 鉴定到属水平、部分乳杆菌菌株准确鉴定到菌种水 Ｈ６ Ｌ一缬氨酸Ｌ一天门冬氨酸一一一一一一…Ｈ７ ２ 一脱氧腺苷 Ｈ８肌苷 一 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ ｂ ｂ ｂ一一＋＋一ｂ ｂ 平。根据供试乳杆菌菌株的特性参数，结合供试乳 杆菌菌株对９５种碳源的利用情况，可将所有供试乳 Ｈ９胸苷 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ Ｈ１０尿苷 ＋＋＋一一十＋一＋＋ Ｈ１１ ５’一单磷酸胸苷 ｂ ｂ ｂ一一＋一一＋一 Ｈ１２ ５’一单磷酸尿苷 一一一一一一一一一一 注：＋，利用阳性；一，利用阴性；ｂ，弱利用。菌株编号对应数 字序号同表２。 由表３分析１０株供试乳杆菌菌株对上述９５种 碳源利用情况，均可利用Ｎ一乙酰一Ｄ一葡糖胺等 ２３种碳源、均不可利用戊五醇等４４种碳源，ｌＯ株供 试乳杆菌菌株对９５种碳源利用特性反应出乳杆菌 属水平碳源利用特征，而各菌株对某些碳源利用程 度的不同，反应出乳杆菌属中不同种间以及不同株 间的碳源利用特征，是进一步区￣ｑ－ＴＬ杆菌属中不同 种及不同株的重要参考因素。 能够利用鼠李糖是鼠李糖乳杆菌的碳源利用特 征，不能利用Ｂ一甲基一Ｄ一葡萄糖苷是类干酪乳杆 菌类干酪亚种不同于其他两个种的碳源利用特 征 ＇。 。由表３可知，菌株ＡＴＣＣ １５００８不利用鼠 李糖，碳源利用特征与菌株ＡＴＣＣ ３９３ 和ＪＣＭ ８１２９ 近似，符合干酪乳杆菌特征，为干酪乳杆菌；菌株 ＪＣＭ ｌ１１１不利用鼠李糖和Ｂ一甲基一Ｄ一葡萄糖 苷，碳源利用特征与菌株ＪＣＭ １０５３近似，符合类干 酪乳杆菌类干酪亚种特征，为类干酪乳杆菌类干酪 亚种；菌株ＡＴＣＣ ５３１０３利用鼠李糖，碳源利用特征 与菌株ＮＢＲＣ ３４２５。。’、ＡＴＣＣ ８５３０、ＡＴＣＣ １０８６３、 ＡＴＣＣ １１９８１近似，符合鼠李糖乳杆菌特征，为鼠李 糖乳杆菌。根据供试乳杆菌菌株对９５种碳源的利 用情况，将菌株ＡＴＣＣ １５００８、ＪＣＭ １１１１和ＡＴＣＣ ５３１０３进一步鉴定到种，鉴定结果与菌株原名称相 符。 杆菌菌株准确鉴定到菌种水平。可作为乳杆菌制品 质量控制及快速鉴定的有效手段。 参考文献： ［１］Ｈａｎｓｅｎ Ｐ Ａ，Ｌｅｓｓｅｌ Ｅ Ｆ．Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｓｅｉ（Ｏｄａ—Ｊｅｎｓ— ｅｎ）ｃｏｍｂ．Ｎｏｖ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ，１９７１，２１：６９— ７１． ［２］Ｓｋｅｒｍａｎ Ｖ Ｂ Ｄ，ＭｃＧｏｗａｎ Ｖ，Ｓｎｅａｔｈ Ｐ Ｈ Ａ ｅｔ ａ１．Ａｐ－ ｐｒｏｖｅｄ Ｌｉｓｔｓ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｎａｍｅｓ［Ｍ］．ＡＳＭ，１９８９． ［３］ Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ Ｄ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ Ｂ Ａ，Ｚａｎｏｎｉ Ｐ．Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｏｍｏｌｏ￣Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｓｅｉ，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌ－ ｌｕｓ Ｐａｒａｃａｓｅｉ ｓｐ．ｎｏｖ，Ｓｕｂｓｐ．Ｐａｒａｃａｓｅｉ ａｎｄ Ｓｕｂｓｐ．Ｔｏ／ｅｒ－ ａ／ｚｓ，ａｎｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｒｈａｍｎｏｓ￣Ｓｐ ｎｏｖ，Ｃｏｍｂ ｎｏｖ［Ｊ］． Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，１９８９，３９：１０５—１０８． ［４］ Ｓｔａｇｅｒ Ｃ Ｅ，Ｄａｖｉｓ Ｊ Ｒ．Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａ－ ｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅ－ ｖｉｅｗｓ，１９９２，５：３０２—３２７． ［５］ 谢家仪，王永力．ＢＩＯＬＯＧ细菌自动鉴定系统的应用与 研究［Ｊ］．微生物学通报，１９９６，２３（５）：２６４—２６７． ［６］ 李运，盛慧，赵荣华．Ｂｉｏｌｏｇ微生物鉴定系统在菌 种鉴定中的应用［Ｊ］．酿酒科技，２００５，１１３（７）：８４— ８５． ［７］ Ｍｉｃｒｏｌｑｇ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｒｅｌｅａｓｅ ４．２ Ｕｓｅｒ Ｇｕｉｄｅ． ［８］ＲＥ．布坎南，Ｎ．Ｅ．吉本斯．伯杰氏细菌鉴定手册（第８ 版）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８４：７９７—８２８． ［９］ 凌代文，东秀珠．乳酸细菌分类鉴定及实验方法［Ｍ］． 北京：中国轻工业出版社，１９９９． ［１０］Ｄｏｂｓｏｎ Ｃ Ｍ，Ｃｈａｂａｎ Ｂ，Ｄｅｎｅｅｒ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｓｅｉ，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ肋口ｍ肋ｓ ，ａｎｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｒｅａｅ Ｉ－ ｓｏｌａｔｅｓ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｂｙ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ［Ｊ］．Ｃａｎ Ｊ Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ，２００４，５０（７）：４８２－４８８． （下转第３９３页） 第４期 廖文生等：钛铁试剂一铜配合物荧光光谱法测定半胱氨酸 ・３９３・ Ａ Ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｃｙｓｔｅｉｎｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔｉｒｏｎ ａｎｄ Ｃｕ（ＩＩ） ＬＩＡＯ Ｗｅｎ－ｓｈｅｎｇ，ＺＨＵ Ｗｅｎ－ｂｉｎｇ，ＷＵ Ｆａｎｇ－ｙｉｎｇ，ＷＡＮ Ｘｉａｏ’ｆｅｎ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔ￣，Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００３ １，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔｉｒｏｎ—Ｃｕ（ＩＩ）ａｎｄ Ｌ—Ｃｙｓｔｅｉｎｅ（Ｃｙｓ）ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｖｉａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｅｓ．Ｉｎ ｐＨ ８．０ Ｂｒｉｔｔｏｎ—Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｂｕｆｆｅｒ，ａ ｓｉｇｎｉｆｃａｎｔ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ａｔ ３５０ ｎｍ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｐｏｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｓ ｉｎｔｏ Ｔｉｒｏｎ—Ｃｕ（ＩＩ）ｓｙｓｔｅｍ．Ａ ｎｅｗ ｓｐｅｃｔｒｏｎｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａ— ｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｖｓ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｉｎｇ ｆｒｏｍ ７．４６ ×１ ０－ ｔｏ ２．２０ ×１０一 ｍ０ｌ／，Ｌ一 ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ａｓ ７．４６ ×１０一 ｍｏｌ／Ｌ一 ．Ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｅａｓｙ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｈｉｇｈ ｓｅ－ ｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ．Ｉｔ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ Ｃｙｓ ｉｎ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９４．０— １００ ７％． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔｉｒｏｎ—Ｃｕ（ＩＩ）ｃｏｍｐｌｅｘ；Ｌ—Ｃｙｓｔｅｉｎｅ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ （上接第３８４页） Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｗａｒｆａｒｉｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓａｍｐｌｅｓ ＸＩＡＯ Ｗｅｉ－ｑｉａｎｇ，ＮＩ Ｙｏｎｇ—ｎｉａｎ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔ￣，Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００３１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｋｉｎｅｔｉｃ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｒｆａｒｉｎ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｏｌｅｔ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｐｅｒｍａｎｇａｎａｔｅ ｂｙ ｗａｒｆａｒｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ａｌｋａｌｉｎｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｔ ７０ ｏＣ ｔｏ ｆｏｒｍ ｇｒｅｅｎ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｍａｎｇａｎａｔｅ ｐｅａｋｅｄ ａｔ ６０８ ｎｍ．Ｉｔ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ａｔ ６０８ ｎｍ ｌｉｎｅａｒｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．５ ｔｏ ６．０ ｇ／ｍＬ，ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ０．１ ６ ｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｒｆａｒｉｎ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ，ｗｈｉｃｈ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｅｌｌ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ，ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｃｌａｉｍｅｄ ｖａｌｕｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｗａｒｆａｒｉｎ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈ０ｔ０ｍｅｔｒｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｋｉｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ；ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ （上接第３８８页） Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｔｈ Ｂｉｏｌｏｇ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｉｆｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ＺＥＮＧ Ｚｈｅ—ｌｉｎｇ，ＬＵＯ Ｍｉｎ，ＬＩＡＮＧ Ｌｉ－ｊｕｎ （Ｔｈｅ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｉｍｓ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｒｅｅ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈａｔ Ｂｉ－ ｏｌｏｇ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｃａｎ ｑｕｉｃｋｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒ（ＰＲＯＢ，ＳＩＭ， ＤＩＳＴ）ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ９５ ｋｉｎｄ ｏｆ ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒ ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ９５ ｋｉｎｄ ｏｆ ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ．ａｌｌ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｔｏ ｓｐｅｃｉｅｓ ｌｅｖｅｌ ｃａｎ ｂｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ．Ｂｉｏｌｏｇ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａ— ｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｓ ａ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅａｓｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔ ｑｕａＩｉｔｖ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｆａｓｔ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂｉｏｌｏｇ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｂｅｓ ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ；ｌｆａｃｔｏｂａｃｉｌｌｃｕｓ；ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｉｆｏｎ
